Abúmina de suero humano Propiedades químicas,Usos,Producción

Propiedades químicas

sólidas

Métodos de purificación

La albúmina se purifica disolviéndola en agua de conductividad y pasándola a 2-4o a través de dos columnas de intercambio iónico, cada una de las cuales contiene una mezcla de 2:1 de resinas aniónicas y catiónicas (Amberlite IR-120, forma H, Amberlite IRA-400, forma OH). Este tratamiento elimina los iones y las impurezas lipídicas. Se tiene cuidado de excluir el CO2, y la solución se almacena a -15o. Se consigue una eliminación más completa de los lípidos liofilizando la solución desionizada, cubriendo la albúmina seca (suero humano) con una mezcla de ácido acético glacial al 5% (v/v) en iso-octano (previamente secada con Na2SO4) y dejándola reposar a 0o (sin agitación) durante más de 6 horas antes de decantar y desechar la mezcla de extracción, lavar con iso-octano, volver a extraer y finalmente lavar dos veces con iso-octano. La albúmina purificada se seca al vacío durante varias horas, luego se dializa contra agua durante 12-24 horas a temperatura ambiente, se liofiliza y se almacena a -10oC. Se ha recristalizado en soluciones de alto (35%) y bajo (22%) EtOH de la Fracción V de Cohn: A 1kg de pasta de albúmina de la Fracción V a -5o se le añaden 300mL de tampón de acetato de pH 0,4 M (pH 5,5) en EtOH al 35% preenfriado a -10o y 430 mL de NaOAc 0,1 M en EtOH al 25% también a -10o. Los mejores resultados se obtienen añadiendo todo el tampón y aproximadamente la mitad del NaOAc y agitando lentamente durante 1 hora. El resto del NaOAc se añade cuando todos los grumos se han desintegrado. La mezcla se aparta a -5o durante varios días para que cristalice. A continuación, se añade EtOH al 35% (1 L) para diluir la suspensión cristalina y reducir la fuerza iónica antes de centrifugar a -5o (rendimiento del 80%). Los cristales se disuelven además en 1,5 volúmenes de EtOH al 15%/0,02M NaCl a -5o y se clarifican por filtración a través de tierra de diatomeas lavada y calcinada. Esta solución puede recristalizarse ajustándose de nuevo a las condiciones de la primera cristalización, o puede recristalizarse al 22% de EtOH con la ayuda de una cantidad muy pequeña de decanol (suficiente para dar una concentración final del 0,02%). Obsérvese que la cristalización a menor concentración de EtOH dio una mejor purificación (es decir, eliminando las globulinas y los hidratos de carbono) y produciendo un producto más estable. La recristalización a baja concentración de EtOH es la siguiente: A 1kg de Fracción V a -10o a -15o se le añaden 500mL de EtOH al 15% a -5o, agitando lentamente hasta que se forme una suspensión uniforme. Al 15% de EtOH (500mL) se añade suficiente solución de NaHCO3 0,2M (125-150mL) a 0o para llevar el pH (dilución 1:10) a 5,3. Se produce un cierto aumento de la temperatura, y hay que tener cuidado de mantener la temperatura Albúmina de suero humano Productos de preparación y materias primas