Lidský sérový albumin Chemické vlastnosti,použití,výroba

Chemické vlastnosti

pevná látka

Metody čištění

Albumin se čistí rozpuštěním ve vodivé vodě a průchodem při 2-4o přes dvě iontově výměnné kolony, z nichž každá obsahuje 2:1 směsi aniontových a kationtových pryskyřic (Amberlite IR-120, H-forma, Amberlite IRA-400, OH-forma). Touto úpravou se odstraní ionty a lipidové nečistoty. Dbá se na vyloučení CO2 a roztok se skladuje při teplotě -15o. Úplnějšího odstranění lipidů se dosáhne lyofilizací deionizovaného roztoku, pokrytím vysušeného albuminu (lidského séra) směsí 5% ledové kyseliny octové (v/v) v isooktanu (předtím vysušené pomocí Na2SO4) a ponecháním při 0o (bez míchání) po dobu až 6 hodin před dekantací a vylitím extrakční směsi, promytím isooktanem, reextrakcí a nakonec dvojím promytím isooktanem. Vyčištěný albumin se několik hodin suší ve vakuu, poté se 12-24 hodin dialyzuje proti vodě při pokojové teplotě, lyofilizuje a uchovává při teplotě -10oC. Byl rekrystalizován ve vysokém (35 %) a nízkém (22 %) roztoku EtOH z Cohnovy frakce V. Rekrystalizace ve vysokém EtOH probíhá následovně: K 1 kg albuminové pasty frakce V při teplotě -5o se přidá 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5) acetátového pufru v 35% EtOH předchlazeného na -10o a 430 ml 0,1 M NaOAc v 25% EtOH rovněž při -10o. Nejlepších výsledků se dosáhne přidáním celého pufru a přibližně poloviny NaOAc a pomalým mícháním po dobu 1 hodiny. Zbytek NaOAc se přidá, když se všechny hrudky rozpadnou. Směs se odloží na několik dní při teplotě -5o , aby vykrystalizovala. Poté se přidá 35% EtOH (1 l), aby se krystalická suspenze zředila a snížila iontová síla před odstředěním při -5o (výtěžek 80 %). Krystaly se dále rozpustí v 1,5 objemu 15% EtOH/0,02M NaCl při teplotě -5o a vyčistí se filtrací přes promytou kalcinovanou diatomitovou zeminu. Tento roztok může být rekrystalizován opětovným přizpůsobením podmínkám první krystalizace nebo může být rekrystalizován při 22% EtOH za pomoci velmi malého množství dekanolu (tolik, aby konečná koncentrace byla 0,02%). Všimněte si, že krystalizace z nižší koncentrace EtOH poskytla lepší přečištění (tj. odstraněním globulinů a sacharidů) a stabilnější produkt. Rekrystalizace při nízké koncentraci EtOH probíhá následovně: K 1 kg frakce V o teplotě -10o až -15o se přidá 500 ml 15% EtOH o teplotě -5o a pomalu se míchá, dokud se nevytvoří homogenní suspenze. K 15% EtOH (500 ml) se přidá dostatečné množství 0,2M roztoku NaHCO3 (125-150 ml) při teplotě 0o, aby se pH (ředění 1:10) zvýšilo na 5,3 %. Dochází k určitému zvýšení teploty a je třeba dbát na to, aby se teplota udržovala Lidský sérový albumin Přípravky a suroviny