Exotičtí plazi se v posledních letech těší stále větší oblibě jako domácí mazlíčci. Tento nárůst popularity vedl ke zvýšení počtu infekcí salmonelou spojených s plazy, které se každoročně vyskytují ve Spojených státech (v současné době se odhaduje na 93 000) (4; J. Mermin, L. Hutwagner, D. Vugia, P. Kirley, J. Bender, J. Koehler, T. McGivern, R. Marcus, F. Angulo, and the FoodNet Working Group, 36th Annu. Meet. Infect. Dis. Soc. Am., 1998 ). Zdá se, že děti mladší 10 let a osoby se sníženou imunitou jsou obzvláště náchylné k infekcím způsobeným Salmonella spp. a často u nich dochází k závažným klinickým průběhům, včetně úmrtí v důsledku septikemie a meningitidy (2, 4). Z tohoto důvodu vláda USA v roce 1975 zakázala obchod se želvami s karapaxem menším než 4 palce zepředu dozadu. Toto opatření vedlo k 77% snížení výskytu salmonelózy způsobené želvami (5). Vzhledem k rostoucí oblibě exotických plazů jako domácích mazlíčků však výskyt salmonelózy spojené s plazy stále roste. Například počet izolovaných případů Salmonella enterica subsp. houtenae serovar Marina od lidí se zvýšil ze 2 případů v roce 1989 na 47 případů v roce 1998 a počet případů S. enterica serovar Poona se zvýšil ze 199 v roce 1989 na 341 v roce 1998 (3). Mezi hlavní sérotypy izolované od pacientů se salmonelózou spojenou s plazy patří sérotypy S. enterica subsp. diarizonae (IIIb), sérotypy S. enterica subsp. houtenae (IV) Chameleon a Marina a sérotypy S. enterica subsp. enterica (I) Java, Stanley a Poona (1). Velmi často byly jako zdroje lidské infekce identifikovány želvy a leguáni, kteří se často volně pohybují v domácnostech chovatelů a slouží dětem jako domácí mazlíčci. Kromě toho byli jako zdroj infekce salmonelami identifikováni také kukuřiční hadi, krajty a hroznýši (1, 4, 5). Sušené preparáty z chřestýšů používané v lidovém léčitelství vedly k závažným salmonelovým infekcím se smrtelnými následky (7, 11).

Ačkoli byli různí plazi, jako jsou leguáni, želvy a hadi, zpětně popsáni jako zdroje lidské salmonelózy (5, 8, 11), není jasné, jak často jsou některé druhy plazů kolonizovány druhy salmonel. Proto jsme prospektivně vyšetřili vzorky trusu dvou chovných skupin hadů na přítomnost salmonel.

Pro posouzení prevalence salmonel byly odebrány vzorky čerstvé stolice 10 zmijím nosorožcům (Bitis nasicornis, Shaw 1802) a 6 zmijím očním (Bothriechis schlegelii, Berthold 1846) s výměníkem a ihned zpracovány podle standardního protokolu pro detekci střevních patogenů. Tento protokol se řídí doporučeními Německé společnosti pro hygienu a mikrobiologii a zahrnuje použití neselektivního krevního agaru, MacConkey agaru, selenitového obohacovacího bujónu a salmonelově selektivních agarů salmonella-shigella agar a xylose-lysine-deoxycholate agar. Všechny agarové plotny byly inkubovány 48 hodin při 37 °C. Po 24 a 48 h byly agarové plotny zkontrolovány na růst salmonel. Obohacovací bujón byl inkubován 18 h při 37 °C a poté přenesen na agar salmonella-shigella a xylose-lysine-deoxycholate, které byly inkubovány při 37 °C dalších 24 h. Identifikace byla provedena pomocí identifikačních systémů API E (BioMerieux, Lyon, Francie). Sérotypizace byla provedena přímou aglutinací na mikrosnímcích (6) v Národním referenčním centru pro enterické patogeny (Institut für Hygiene und Umwelt, Hamburk, Německo). Vytvoření antisér bylo provedeno imunizací novozélandských králíků podle pokynů Světové zdravotnické organizace (9). Pro elektroforézu v pulzním poli (PFGE) byla genomová DNA štěpena pomocí XbaI. Výsledné fragmenty byly rozděleny v 1% agarózovém gelu pomocí systému CHEF DR III (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Kalifornie). Doby pulzů se pohybovaly od 5 do 35 s po dobu 32 hodin při 6 V a 14 °C. Gely byly obarveny ethidium bromidem, odbarveny v destilované vodě a vyfotografovány při UV osvětlení. Profily PFGE byly analyzovány podle zavedených kritérií uvedených Tenoverem a spolupracovníky (10).

Kmeny salmonel séroskupiny IIIb byly izolovány ze vzorků trusu všech hadů B. nasicornis a tří ze šesti hadů B. schlegelii. Přehled výsledků sérologické typizace je uveden v tabulce Tabulka1.1. Celkem bylo izolováno 12 sérovarů salmonel séroskupiny IIIb, přičemž jediný sérovar 48:i:z byl izolován od různých hadů. Následné vzorky byly získány od čtyř zvířat v průběhu 1 až 22 měsíců. Všichni tito hadi byli trvale kolonizováni kmeny salmonel séroskupiny IIIb. Sérotypizace odhalila identické kmeny u hada B. nasicornis 5 po celou dobu sledování (tabulka (Table1).1). Klonální identita těchto kmenů byla prokázána metodou PFGE (obr. (obr.1).1). U ostatních tří hadů došlo v průběhu sledování ke změnám kolonizujících sérovarů salmonel (Tabulka (Tabulka1).1). U hada B. nasicornis 2 došlo během 1 měsíce ke změně ze sérotypu Salmonella 17:l,v:z35 na sérotyp Salmonella 48:i:z . Tento kmen byl identický s kmenem izolovaným z B. nasicornis snake 3, jak ukazuje PFGE (obr. (obr.1).1). Identické klony salmonel sérotypu 48:i:z, které se lišily od klonů izolovaných z hadů B. nasicornis, byly nalezeny také u dvou hadů B. schlegelii (obr. (obr. 1).1). Tento výsledek může být způsoben tím, že dva hadi B. nasicornis i dva hadi B. schlegelii s tímto sérovarem byli před touto studií chováni společně pro účely chovu. Všechna ostatní zvířata zkoumaná v této studii byla vždy chována samostatně v oddělených klecích. Analýza PFGE kmene salmonel sérotypu 48:i:z izolovaného z hada B. nasicornis 10 ukázala odlišný pásový vzor.

Antibiotické testy byly provedeny diskovou difuzní metodou a odhalily citlivost všech izolátů salmonel na peniciliny, cefalosporiny, karbapenemy, aminoglykosidy a fluorochinolony.

Není jasné, zda hadi získali salmonely v děloze, perinatálně, pozřením kontaminované kořisti nebo kontaktem s kontaminovanými výkaly jiných plazů. V naší studijní skupině 16 domácích hadů vykazovala salmonela séroskupiny IIIb vysokou prevalenci (81 %). Počty vyšetřených hadů jsou příliš malé pro statistickou analýzu, ale 100 % hadů B. nasicornis bylo kolonizováno, zatímco séroskupina IIIb salmonel byla detekována pouze u 50 % hadů B. schlegelii. Toto zjištění může být způsobeno rozdílným chováním těchto druhů hadů. B. nasicornis je had žijící na zemi, zatímco B. schlegelii obývá keře a stromy. Zejména pokud jsou tito hadi chováni v teráriích, je u B. nasicornis zvýšené riziko kontaktu s kontaminovanými výkaly. Pozorování, že ti hadi, kteří byli po určitou dobu chováni společně, vykazovali identické izoláty salmonel séroskupiny IIIb, podporuje předpoklad, že ke kolonizaci dochází především kontaktem s kontaminovanými výkaly. Skupina B. nasicornis byla navíc krmena výhradně hlodavci od dodavatele, jehož kontrolní kultury zvířat byly pravidelně negativní na střevní patogeny, včetně Salmonella spp. Proto je přenos kontaminovanou kořistí u této chovné skupiny hadů velmi nepravděpodobný.

Naše studie je prvním prospektivním šetřením prevalence sérovarů salmonel séroskupiny IIIb u dvou chovných skupin domácích hadů. Naše výsledky ukazují, že velmi vysoké procento hadů je kolonizováno bakteriemi Salmonella spp. Toto zjištění se zřejmě týká zejména hadů žijících na zemi. Za účelem prevence infekcí způsobených salmonelami u plazů vydalo Centrum pro kontrolu a prevenci nemocí doporučení pro zacházení s plazy. Kromě standardních doporučení, jako je například důkladné mytí rukou vodou a mýdlem po manipulaci s plazy nebo klecemi s plazy, tato doporučení stanoví, že plazi (i) by neměli být chováni ve střediscích péče o děti, (ii) neměli by být chováni v domácnostech s dětmi mladšími než 1 rok a imunokompromitovanými osobami a (iii) neměli by se volně pohybovat po celém domě nebo obytném prostoru (4).

.