Humant serumalbumin Kemiske egenskaber, anvendelse, produktion

Kemiske egenskaber

fast

Rensningsmetoder

Albumin renses ved at opløse det i konduktivt vand og passerer ved 2-4o gennem to ionbytningskolonner, der hver indeholder en 2:1-blanding af anioniske og kationiske harpikser (Amberlite IR-120, H-form, Amberlite IRA-400, OH -form). Denne behandling fjerner ioner og lipidforureninger. Man sørger for at udelukke CO2, og opløsningen opbevares ved -15o C. En mere fuldstændig lipidfjernelse opnås ved at lyofilisere den afioniserede opløsning, dække det tørrede albumin (humant serum) med en blanding af 5% isoeddikesyre (v/v) i iso-oktan (tidligere tørret med Na2SO4) og lade det stå ved 0o (uden omrøring) i mere end 6 timer før dekantering og bortskaffelse af ekstraktionsblandingen, vask med iso-oktan, genekstrahering og endelig vask to gange med iso-oktan. Det rensede albumin tørres under vakuum i flere timer og dialyseres derefter mod vand i 12-24 timer ved stuetemperatur, fryses og opbevares ved -10oC . Det er blevet omkrystalliseret i høje (35%) og lave (22%) EtOH-opløsninger fra Cohn’s fraktion V. Omkrystalliseringen i høje EtOH-opløsninger er som følger: Til 1 kg albuminpasta fraktion V ved -5o tilsættes 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5)-acetatbuffer i 35 % EtOH, der er forkølet til -10o , og 430 ml 0,1 M NaOAc i 25 % EtOH, ligeledes ved -10o . De bedste resultater opnås ved at tilsætte hele bufferen og ca. halvdelen af NaOAc og omrøre langsomt i 1 time. Resten af NaOAc tilsættes, når alle klumperne er opløst. Blandingen sættes til side ved -5o i flere dage for at krystallisere. Derefter tilsættes 35% EtOH (1 L) for at fortynde den krystallinske suspension og sænke ionstyrken, inden den centrifugeres ved -5o (udbytte 80%). Krystallerne opløses yderligere i 1,5 volumener 15% EtOH/0,02 M NaCl ved -5o og klares ved filtrering gennem vasket, kalcineret diatomejord. Denne opløsning kan omkrystalliseres ved at justere til betingelserne i den første krystallisering, eller den kan omkrystalliseres ved 22% EtOH ved hjælp af en meget lille mængde decanol (nok til at give en slutkoncentration på 0,02%). Det skal bemærkes, at krystallisering ved en lavere koncentration af EtOH gav en bedre rensning (dvs. ved at fjerne globuliner og kulhydrater) og gav et mere stabilt produkt. Omkrystalliseringen ved lav EtOH-koncentration er som følger: Til 1 kg fraktion V ved -10o til -15o tilsættes 500 ml 15% EtOH ved -5o , og der omrøres langsomt, indtil der dannes en ensartet suspension. Til 15% EtOH (500 ml) tilsættes tilstrækkelig 0,2 M NaHCO3-opløsning (125-150 ml) ved 0o for at bringe pH-værdien (fortynding 1:10) op på 5,3. Der sker en vis temperaturstigning, og man skal være opmærksom på at holde temperaturen Humant serumalbumin Præparat Produkter og råmaterialer