Abumine de sérum humain Propriétés chimiques,utilisations,production

Propriétés chimiques

solides

Méthodes de purification

L’albumine est purifiée par dissolution dans de l’eau de conductivité et passage à 2-4o à travers deux colonnes d’échange d’ions, chacune contenant un mélange 2 :1 de résines anioniques et cationiques (Amberlite IR-120, forme H, Amberlite IRA-400, forme OH). Ce traitement élimine les ions et les impuretés lipidiques. On prend soin d’exclure le CO2, et la solution est stockée à -15o. Une élimination plus complète des lipides est obtenue en lyophilisant la solution désionisée, en recouvrant l’albumine séchée (sérum humain) d’un mélange d’acide acétique glacial à 5 % (v/v) dans de l’iso-octane (préalablement séché avec du Na2SO4) et en laissant reposer à 0o (sans agitation) pendant plus de 6 heures avant de décanter et de jeter le mélange d’extraction, de laver avec de l’iso-octane, de réextraire et enfin de laver deux fois avec de l’iso-octane. L’albumine purifiée est séchée sous vide pendant plusieurs heures, puis dialysée contre de l’eau pendant 12-24 heures à température ambiante, lyophilisée et stockée à -10oC . Elle a été recristallisée dans des solutions à forte teneur en EtOH (35 %) et à faible teneur en EtOH (22 %) à partir de la fraction V de Cohn : A 1kg de pâte d’albumine de la Fraction V à -5o, on ajoute 300mL de tampon acétate 0.4 M pH (pH 5.5) dans 35% EtOH pré-refroidi à -10o et 430 mL de NaOAc 0.1 M dans 25% EtOH également à -10o. Les meilleurs résultats sont obtenus en ajoutant la totalité du tampon et environ la moitié du NaOAc et en agitant lentement pendant 1 heure. Le reste du NaOAc est ajouté lorsque tous les grumeaux se sont désintégrés. Le mélange est mis de côté à -5o pendant plusieurs jours pour cristalliser. De l’EtOH à 35% (1 L) est ensuite ajouté pour diluer la suspension cristalline et diminuer la force ionique avant la centrifugation à -5o (rendement 80%). Les cristaux sont ensuite dissous dans 1,5 volumes d’EtOH à 15%/0,02M NaCl à -5o et clarifiés par filtration à travers une terre de diatomées lavée et calcinée. Cette solution peut être recristallisée en réajustant les conditions de la première cristallisation, ou elle peut être recristallisée à 22% d’EtOH à l’aide d’une très petite quantité de décanol (suffisante pour donner une concentration finale de 0,02%). Notez que la cristallisation à partir d’une concentration plus faible d’EtOH a donné une meilleure purification (c’est-à-dire en éliminant les globulines et les hydrates de carbone) et en produisant un produit plus stable. La recristallisation à faible concentration d’EtOH est la suivante : A 1kg de Fraction V à -10o à -15o est ajouté 500mL de 15% EtOH à -5o, agité lentement jusqu’à ce qu’une suspension uniforme soit formée. À l’EtOH à 15 % (500 ml), on ajoute une quantité suffisante de solution de NaHCO3 0,2 M (125-150 ml) à 0o pour porter le pH (dilution 1:10) à 5,3. Une certaine élévation de température se produit, et il faut veiller à maintenir la température Sérum-albumine humaine Produits de préparation et matières premières