Humán szérum albumin Kémiai tulajdonságok,felhasználás,előállítás
Kémiai tulajdonságok
szilárd
Tisztítási módszerek
Az albumint vezetőképes vízben való feloldással és 2-4o hőmérsékleten két ioncserélő oszlopon való áthaladással tisztítják, amelyek egyenként 2:1 anionos és kationos gyanták (Amberlite IR-120, H-forma, Amberlite IRA-400, OH-forma) keverékét tartalmazzák. Ez a kezelés eltávolítja az ionokat és a lipid szennyeződéseket. Gondoskodunk a CO2 kizárásáról, és az oldatot -15o -on tároljuk. A lipidek teljesebb eltávolítása úgy érhető el, hogy az ionmentesített oldatot liofilizáljuk, a szárított albumint (emberi szérum) 5%-os jégecetsav (v/v) izo-oktánban oldott keverékével fedjük (előzőleg Na2SO4-mal szárított), és 0o -on (keverés nélkül) hagyjuk állni legalább 6 órán át, majd dekantáljuk és eldobjuk az extrakciós keveréket, izo-oktánnal mossuk, újra extraháljuk, és végül kétszer mossuk izo-oktánnal. A tisztított albumint néhány órán át vákuumban szárítjuk, majd szobahőmérsékleten 12-24 órán át vízzel szemben dializáljuk, liofilizáljuk és -10oC-on tároljuk. Átkristályosítottuk magas (35%) és alacsony (22%) EtOH oldatban a Cohn V. frakciójából: Az V. frakció 1 kg -5o -os albuminpasztájához 300 ml 0,4 M pH-jú (pH 5,5) acetát puffert adunk 35%-os EtOH-ban, amelyet -10o -ra előhűtöttünk, és 430 ml 0,1 M NaOAc-t 25%-os EtOH-ban, szintén -10o -ban. A legjobb eredményt akkor kapjuk, ha az összes puffert és a NaOAc kb. felét adjuk hozzá, és lassan keverjük 1 órán keresztül. A maradék NaOAc-t akkor adjuk hozzá, amikor az összes csomó szétesett. Az elegyet -5o -on néhány napra félretesszük, hogy kikristályosodjon. Ezután 35%-os EtOH-t (1 l) adunk a kristályos szuszpenzió hígításához és az ionerősség csökkentéséhez, mielőtt -5o -nál centrifugáljuk (hozam 80%). A kristályokat tovább oldjuk 1,5 térfogat 15%-os EtOH/0,02M NaCl-ban -5o -on, és tisztítjuk mosott, kalcinált diatómaföldön keresztül történő szűréssel. Ez az oldat átkristályosítható az első kristályosítás körülményeinek újbóli beállításával, vagy átkristályosítható 22%-os EtOH mellett, nagyon kis mennyiségű dekanol segítségével (ez elegendő ahhoz, hogy a végső koncentráció 0,02% legyen). Megjegyzendő, hogy az alacsonyabb EtOH-koncentrációból történő kristályosítás jobb tisztítást eredményezett (pl. a globulinok és szénhidrátok eltávolításával) és stabilabb terméket eredményezett. Az alacsony EtOH-koncentrációjú átkristályosítás a következőképpen történik: A -10o és -15o közötti hőmérsékleten lévő V. frakció 1 kg-ához 500 ml 15%-os EtOH-t adunk -5o hőmérsékleten, lassan keverve, amíg egységes szuszpenzió nem keletkezik. A 15%-os EtOH-hoz (500ml) 0o -on elegendő 0,2M NaHCO3 oldatot (125-150ml) adunk, hogy a pH (1:10 hígítás) 5,3 legyen. Némi hőmérséklet-emelkedés következik be, és ügyelni kell a hőmérséklet megtartására Humán szérumalbumin előállítása Termékek és nyersanyagok