A leukocita balra tolódásának számszerűsítése
A legkorábbi morfológiailag felismerhető neutrofil típusok a myeloblast, a promyelocita és a myelocita. Ezek a sejtek metamyelocitákká, majd szalagokká, végül szegmentált neutrofilekké érnek (7.4. ábra). A myeloblastok, promyelociták és myelociták képesek a sejtosztódásra, amint azt a nukleáris DNS-ükbe történő tritiált timidin beépülés bizonyítja, és amit közvetlen tenyésztéses megfigyeléssel igazolnak.22,23 A neutrofilek e három korai szakaszát együttesen neutrofil mitotikus kompartmentnek vagy neutrofil proliferatív poolnak nevezik. A fertőzés során a neutrofil mitotikus kompartment jellemzően egy vagy két további sejtosztódással bővíti a proliferatív medence méretét.23 Egy további osztódással megduplázódik a termelődő érett neutrofilek száma. A fertőzés során a csontvelőben a promielociták és a myelociták száma jellemzően megnő a hozzáadott sejtosztódások miatt.24
A neutrofil balra tolódás egy olyan kifejezés, amelyet a keringésben lévő éretlen neutrofilek rendellenes növekedésének jelzésére használnak.25-27 A baloldali eltolódás számszerűsítésének egyik módszere, különösen az újszülöttkori hematológiában, az éretlen és a teljes (I/T) neutrofilok aránya.25-30 A több neutrofil szállítására szolgáló mechanizmus a fertőzött szövetekbe az éretlen posztmitotikus neutrofilek (metamyelociták és bandák) idő előtti kibocsátása a csontvelőből a keringésbe. Ez az arány növekedéséhez vezet.26,31-35
Az I/T neutrofil arányhoz manuális differenciálsejtszámlálásra van szükség; a hematológiai technológus mikroszkóposan megvizsgál 100 leukocitát egy festett vérfilmen, és morfológiai jellemzők alapján minden egyes sejtet megszámol. Az I/T arányt általában úgy számítják ki, hogy a sávos neutrofilek és a metamyelociták százalékos arányát elosztják a szegmentált neutrofilek és a sávos neutrofilek és a metamyelociták százalékos arányával. A baloldali eltolódás számszerűsítésének másik gyakori módszere az abszolút sávszámlálás, amely szintén manuális differenciálást igényel. A sávokként azonosított leukociták százalékos arányát megszorozzuk a leukocitaszámmal, és az értéket sávok/μl vérben fejezzük ki.36 Az I/T arány megbízhatóságát befolyásolja, hogy a neutrofilek sávokként vagy szegmentált formaként való besorolásában nagy megfigyelők közötti különbségek vannak.29
Az automatizált leukocita differenciálsejtszám viszonylag új innováció a klinikai laboratóriumi hematológiában; nagyszámú leukocitát áramlási citometriás technikával kategorizálnak méretük és citoplazmatikus és nukleáris jellemzőik alapján.4,28,37 A promilociták, myelociták és metamyelociták kis hányada kijut a csontvelőből és megtalálható a vérben, és ezek bizonyos hematológiai analizátorokkal mérhetők. A Sysmex hematológiai analizátorok egyes modelljein végzett automatizált differenciálsejtszámlálás során a bal oldali eltolódást az éretlen granulociták (IG-k) számszerűsítik. Ezek az eredmények az éretlen granulociták százalékában (IG%) vagy az abszolút éretlen granulocitaszámban (IG/μL) jelenthetők. Az IG% és az IG/μL némileg analóg, de technikailag különbözik az I/T neutrofil aránytól és az abszolút sávszámtól. Az automatizált differenciáldiagnosztika előnye, hogy nem igényel vérkenetet vagy a technikusnak a mikroszkópos elemzés elvégzéséhez szükséges időt.4,5 Ezenkívül felnőtt populációkból a megszámlált leukociták sokkal nagyobb mintája alapján az automatizált differenciáldiagnosztika jobb teljesítményéről számoltak be a manuális módszerekkel szemben. Emellett a sejttípusok megkülönböztetése során megszűnik az emberi hiba, mivel a sejttípusok hozzárendelése automatikusan, előre beállított gating technikák segítségével történik.38 A 7.5. ábra a Sysmex analizátorok által előállított fehérvérsejt-differenciál (WDF) csatornát mutatja.6
A felnőtt betegek esetében számos klinikai laboratóriumban az automatizált differenciálszámlálás felváltotta a kézi számlálást.5,39 Az automatizált leukocita differenciálszámlálás bevezetésének akadálya a neonatológiában az IG% és IG/μL referenciaintervallumok hiánya volt az újszülött populációkban.40 Továbbá az IG% és az IG/μL mint a fertőzés biomarkerei hasznosságát nem hasonlították össze közvetlenül az I/T neutrofil arány és az abszolút sávszám értékével fertőzött és nem fertőzött újszülöttek esetében.
Az IG% és az IG/μL referenciaintervallumait (5. és 95. percentilis alsó és felső határa) olyan újszülöttek CBC-je alapján alakították ki, akiknél nem volt fertőzésre utaló jel. A 7.6. ábra az IG% és az IG/μL referencia-intervallum diagramjait mutatja a születést követő első hétre.41
A baloldali eltolódás számszerűsítésének négy módszere hasonló statisztikai teljesítményt mutatott a fertőzés diagnózisának felvetésében (7.1. táblázat). Mind a négy módszer esetében az érzékenység gyenge (12%-15%), míg a specificitás erős (90%-95%) volt, a pozitív prediktív érték (PPV) és a negatív prediktív érték (NPV) pedig jellemzően az alacsony és a középső 60% között volt. A négy kombinációja általában csökkentette az érzékenységet, de növelte a PPV-t.41
Az I/T neutrofil arány nem érzékeny módszer a fertőzés azonosítására, de a magas érték meglehetősen specifikus a fertőzésre. Az IG/μL és a sávszám hasonlóan teljesített, mint az I/T arány és az IG%. Ezek az eredmények arra engedtek következtetni, hogy a legtöbb célra az automatizált differenciálszámlálás ugyanolyan jól használható, mint a kézi differenciálszámlálás, hasonlóan a felnőttekből nyert CBC-kből levont következtetésekhez.39,42 Ezenkívül három olyan kézi differenciálszámlálást találtunk, amelyekben feltételezésünk szerint átviteli hibák voltak (sávok kerültek a seg oszlopba, és fordítva). Ezekben az esetekben rendkívül magas volt az I/T arány (>0,8), de a betegek jól tűntek, és amikor a CBC-ket azonnal megismételtük, az I/T arányok normálisak voltak (<0,2). Ilyen hibák nem fordulnának elő automatizált differenciálszámlálással.
A leukocita differenciálszámlálással ellátott CBC az egyik leggyakoribb laboratóriumi vizsgálat, amelyet újszülötteken és kisgyermekeken rendelnek. Arra a következtetésre jutottunk, hogy a leukociták balra tolódásának számszerűsítésére szolgáló módszerként a Sysmex hematológiai analizátorral végzett automatizált differenciálszámlálásból származó IG% és IG/μL összehasonlítható a kézi differenciálszámláláson alapuló I/T arányhoz és abszolút sávszámhoz, bár az IG és I/T értékek rosszul korrelálnak. A más típusú sejtszámlálókkal végzett automatizált leukocita differenciálszámlálást szintén össze kell hasonlítani a kézi differenciálszámlálással. Arra a következtetésre jutottunk, hogy az automatizált differenciálszámlálásnak elegendőnek kell lennie az újszülöttgyógyászatban. Azon kiválasztott újszülöttek esetében, akiknél a CBC célja a fertőzés azonosítása, a manuális differenciálszámlálás hozzáadása kissé javíthatja a vizsgálat teljesítményét.