En el presente estudio, se observó la actividad antibacteriana del aceite esencial de romero (Rosmarinus officinalis L. Labiatae) contra Propionibacterium acnes (P. acnes) con microscopía de fuerza atómica (AFM). El valor de la CIM (concentración inhibitoria mínima) del aceite esencial de romero contra P. acnes fue de 0,56 mg/mL. Se observaron cambios significativos en la morfología y el tamaño de P. acnes mediante microscopía de fuerza atómica (AFM) en respuesta al tratamiento con aceite esencial. El aceite esencial se adhirió por primera vez a la superficie de P. acnes a baja concentración, la anchura y la altura del cuerpo bacteriano aumentaron, mientras que la longitud no cambió considerablemente. Al aumentar la concentración del aceite esencial, los cuerpos bacterianos resultaron muy dañados. La longitud, la anchura y la altura se redujeron, cuando la concentración se incrementó hasta 64xMIC, la longitud, la anchura y la altura se redujeron en un 42,56%, 92,00% y 41,58%, respectivamente. Además, las bacterias tratadas perdieron su forma nativa, la pared celular se descamó y el citoplasma se filtró fuera del cuerpo bacteriano, conduciendo finalmente a la muerte bacteriana. Con el aumento del tiempo en el MIC, la longitud de las bacterias se redujo a las 8 h, la anchura y la altura se redujeron gradualmente, la forma de la célula se distorsionó, y finalmente condujo al daño de la pared celular y a la muerte bacteriana a las 8 h. En conclusión, la investigación por AFM de la morfología y el tamaño de P. ACNES tratada con aceite esencial de romero representa una técnica poderosa, que en general puede aplicarse para revelar los mecanismos de cambio biológico de las bacterias inducidos por agentes antibacterianos a nivel nanométrico.