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ここ数年、ペットとしてのエキゾチック爬虫類は人気が高まってきている。 この人気の高まりにより、米国で毎年発生する爬虫類関連のサルモネラ感染症が増加している(現在、93,000人と推定)(4; J. Mermin, L. Hutwagner, D. Vugia, P. Kirley, J. Bender, J. Koehler, T. McGivern, R. Marcus, F. Angulo, and the FoodNet Working Group, 36th Annu. Meet. Infect. Dis. Soc. Am., 1998 )で発表された。 10歳以下の小児や免疫不全者は、特に爬虫類関連サルモネラ属菌に感染しやすいようで、敗血症や髄膜炎による死亡を含む重篤な臨床経過をたどることが多い(2, 4)。 このため、1975年に米国政府は甲羅の前後が4インチ以下のカメの取引を禁止した。 この措置により、カメに関連するサルモネラ症は77%減少した(5)。 しかし、ペットとしてのエキゾチックな爬虫類の人気が高まっているため、爬虫類のサルモネラ症の発生率は依然として増加している。 例えば、ヒトからのSalmonella Enterica subsp. houtenae serovar Marinaの分離は1989年の2例から1998年には47例に増加し、S. enterica serovar Poonaは1989年の199例から1998年には341例に増加した(3)。 爬虫類関連サルモネラ症患者から分離される主な血清型は、S. enterica subsp. diarizonae (IIIb) serovars、S. enterica subsp. houtenae (IV) serovars Chameleon and Marina, S. enterica subsp. enterica (I) serovars Java, Stanley and Poonaである (1). また、飼育家の中で放し飼いにされ、子供のペットとして飼われているカメやイグアナが、ヒトへの感染源となるケースが非常に多く確認されている。 さらに、コーンスネーク、パイソン、ボアなどもサルモネラ感染源として確認されている(1, 4, 5)。 イグアナ、カメ、ヘビなど様々な爬虫類がヒトのサルモネラ感染源として遡及的に報告されているが(5、8、11)、特定の種類の爬虫類がどの程度の頻度でサルモネラ属菌に汚染されているのかは不明である。 そこで、我々はヘビの2つの飼育グループから糞便サンプルを採取し、サルモネラの存在について前向きにスクリーニングした。

サルモネラの有病率を評価するために、10匹のサイホーンバイパー(Bitis nasicornis, Shaw 1802)および6匹のアイラブバイパー(Bothriechis schlegelii, Berthold 1846)からスワップを使用して新鮮な便サンプルを収集し、腸管病原菌検出の標準プロトコルに従ってすぐに処理した。 このプロトコルは、ドイツ衛生微生物学会の勧告に従い、非選択性血液寒天、MacConkey寒天、亜セレン酸濃縮ブロス、サルモネラ選択性寒天サルモネラ・シゲラ寒天、キシロース・リシン・デオキシコール酸寒天を使用する。 すべての寒天培地は37℃で48時間培養された。 24時間および48時間後、寒天培地プレートはサルモネラの増殖の有無を検査した。 濃縮ブロスを37℃で18時間培養した後,サルモネラ-シゲラ寒天培地とキシロース-リジン-デオキシコール酸培地に移し,さらに24時間37℃で培養した.同定にはAPI E識別システム (BioMerieux, Lyon, France)を用いた. 血清型判定は、国立腸管病原体参照センター(Institut für Hygiene und Umwelt, Hamburg, Germany)のマイクロスライドを用いた直接凝集法(6)により行った。 抗血清の作製は、WHOのガイドライン(9)に従って、New Zealandウサギの免疫によって行われた。 パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)のために、ゲノムDNAはXbaIで消化した。 得られた断片は、CHEF DR III system (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Calif.)を用いて1%アガロースゲルで分離した。 ランプパルス時間は、6V、14℃で32時間かけて5秒から35秒の範囲であった。 ゲルは臭化エチジウムで染色し、蒸留水で脱染し、UV照明下で写真撮影した。 PFGEプロファイルはTenoverらによって概説された確立された基準に従って解析した(10).

血清群IIIbのSalmonella株がB. nasicornisヘビすべての糞便試料とB. schlegeliiヘビ6匹のうち3匹から分離された. 血清学的型別結果の概要を表1.1に示す. 合計でSalmonella serogroup IIIbの12血清型が分離され、48:i:zは異なるヘビから分離された唯一の血清型であった。 4匹の動物から1カ月から22カ月にわたる追跡調査サンプルを得た。 これらのヘビはすべてSalmonella serogroup IIIb株によって恒久的にコロニー化されていた. 血清型別では、B. nasicornisヘビ5匹に全経過にわたって同一株が検出された(表(Table1).1)。 これらの菌株のクローン性同一性はPFGEによって証明された(図(Fig.1).1)。 他の3匹のヘビでは、追跡期間中にコロニー形成するSalmonella血清バーの変化が認められた(表(Table1).1)。 B. nasicornis snake 2は1ヶ月でSalmonella serotype 17:l,v:z35からSalmonella serotype 48:i:zに変化していた。 この株は、PFGEで示されるように、B. nasicornis snake 3から分離された株と同一であった(図(Fig.1).1)。 B. nasicornisヘビから分離されたものとは異なるSalmonella血清型48:i:zの同一クローンが、B. schlegeliiヘビ2匹からも検出された(図(Fig.1).1)。 この結果は、この血清型を持つ2匹のB. nasicornisヘビと2匹のB. schlegeliiヘビが、本研究以前に繁殖目的で一緒に飼われていたことに起因すると思われる。 本研究で調査した他の動物は、常に別々のケージで単独飼育されていた。 B. nasicornis snake 10から分離されたSalmonella血清型48:i:z株のPFGE解析では、異なるバンドパターンを示した。

Salmonella serogroup IIIb 12株におけるPFGE。 レーン1、B. nasicornis snake 1からの血清型50:r:z53の分離株;レーン2〜6、B. nasicornis snake 2と3(それぞれレーン2と3)、B. nasicornis snake 10(レーン4)、B. schlegelii snake 1と3(レーン5と6)から分離した血清型48:i:zの分離株;レーン7、B.からの血清型59:z10:z53の分離株. nasicornis snake 4からの分離株;レーン8および9、B. nasicornis snake 5からの血清バー61:i:zの分離株;レーン10〜12、B. nasicornis snake 9からの血清バー61:c:z35(レーン10)および47:z52:e,n,x,z15(レーン11および12)の分離株である

TABLE 1.

13 個のヘビから分離した Salmonella serogroup IIIb 株の血清型別結果a

の場合

4

の場合

の場合

Snake Age (yr) O antigen H1 antigen H2 antigen
B. nasicornis
1 3 50 r z53
2 17 l,v z35
48 i z
3 4 48 i z
0.5 59 z10 z53
5 0.5 61 i z
61 i z
6 5 18 l,v z
7 5 50 r z
8 3 38 k z
50 z52 z35
9 3 61 3 3c z35
47 z52 e,n,x,z15
47 z52 e,n,x,z15
10 3 48 i z
B. schlegelii
1 48 i z
2 2 3255 50 k z
3 48 i z
a縦長のサンプルは B. を検討しました。 nasicornisのヘビ2、5、8、9について縦断的なサンプルを調査した。 フォローアップサンプルは、1ヶ月後(ヘビ2)、11ヶ月後(ヘビ5)、15ヶ月後(ヘビ8)、11および22ヶ月後(ヘビ9)に採取した。

抗菌性試験はディスク拡散法により行い、すべてのサルモネラ分離株のペニシリン、セファロスポリン、カルバペネム、アミノグリコシドおよびフルオロキノロンの感受性の有無を明らかにした。

ヘビが子宮内、周産期、汚染された餌の摂取、または他の爬虫類の汚染された糞との接触によってサルモネラを獲得したかどうかは不明である。 本研究で対象とした16匹のペットヘビグループでは,Salmonella serogroup IIIbが81%と高い有病率を示した. しかし,B. nasicornisでは100%検出されたのに対し,B. schlegeliiでは50%しか検出されず,Salmonella serogroup IIIbは検出されなかった. この結果は、ヘビ種の行動様式の違いによるものと思われる。 B. nasicornisは地上に棲息するヘビであるが,B. schlegeliiは藪や木に棲息する. 特にテラリウムで飼育されている場合、B. nasicornisは汚染された糞に接触する危険性が高い。 これらのヘビがしばらく一緒に飼育されると、同一のSalmonella serogroup IIIbが分離されることから、コロニー形成は主に汚染された糞便との接触によって起こると考えられた。 さらに、B. nasicornisグループは、Salmonella spp.を含む腸管病原体の監視培養が定期的に陰性である供給者からのネズミのみを与えられていた。 したがって、このヘビの飼育グループにおける汚染された餌による感染は非常に低い。

我々の研究は、ペットヘビの二つの飼育グループにおけるSalmonella serogroup IIIb血清群の有病率を初めて前向き調査で行ったものである。 その結果、非常に高い割合でSalmonella spp.が定着していることが明らかになった。 この知見は、特に地上に棲息するヘビに当てはまる。 爬虫類関連サルモネラ感染症を予防するために、米国疾病管理予防センターは爬虫類の取り扱いに関する勧告を発表している。 爬虫類や爬虫類のケージを扱った後は、石鹸と水で十分に手洗いするなどの標準的な勧告の他に、これらの勧告では、爬虫類を (i) 託児所で飼育してはならない、 (ii) 1歳未満の子供や免疫不全者のいる家庭には入れない、 (iii) 家や生活圏内で自由に動き回れるようにしてはならない (4) などが定められています

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