humaan serumalbumine Chemische eigenschappen,toepassingen,productie

chemische eigenschappen

vast

zuiveringsmethoden

Albumine wordt gezuiverd door het op te lossen in geleidingswater en bij 2-4o door twee ionenwisselingskolommen te laten passeren, die elk een 2:1 mengsel van anionische en kationische harsen (Amberlite IR-120, H-vorm, Amberlite IRA-400, OH-vorm). Deze behandeling verwijdert ionen en lipide-onzuiverheden. CO2 wordt geweerd en de oplossing wordt bewaard bij -15o. Een vollediger verwijdering van lipiden wordt bereikt door de gedeïoniseerde oplossing te vriesdrogen, de gedroogde albumine (humaan serum) te bedekken met een mengsel van 5% ijsazijn (v/v) in iso-octaan (vooraf gedroogd met Na2SO4) en gedurende meer dan 6 uur bij 0o te laten staan (zonder te roeren) alvorens het extractiemengsel te decanteren en weg te gooien, te wassen met iso-octaan, opnieuw te extraheren en ten slotte tweemaal te wassen met iso-octaan. De gezuiverde albumine wordt gedurende enkele uren onder vacuüm gedroogd, vervolgens gedurende 12-24 uur bij kamertemperatuur tegen water gedialyseerd, gevriesdroogd en bij -10oC bewaard. Het is geherkristalliseerd in hoge (35%) en lage (22%) EtOH-oplossingen van Cohn’s Fractie V. De hoge EtOH-herkristallisatie gaat als volgt: Aan 1 kg albumine pasta van Fractie V bij -5o wordt 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5) acetaat buffer in 35% EtOH voorgekoeld tot -10o toegevoegd en 430 ml 0,1 M NaOAc in 25% EtOH ook bij -10o. De beste resultaten worden verkregen door alle buffer en ongeveer de helft van het NaOAc toe te voegen en gedurende 1 uur langzaam te roeren. De rest van het NaOAc wordt toegevoegd wanneer alle klontjes uiteengevallen zijn. Het mengsel wordt enkele dagen bij -5o bewaard om te kristalliseren. Vervolgens wordt 35% EtOH (1 liter) toegevoegd om de kristallijne suspensie te verdunnen en de ionische sterkte te verlagen, alvorens te centrifugeren bij -5o (opbrengst 80%). De kristallen worden verder opgelost in 1,5 volume 15% EtOH/0,02M NaCl bij -5o en geklaard door filtratie door gewassen, gecalcineerde diatomeeënaarde. Deze oplossing kan opnieuw worden gekristalliseerd door aanpassing aan de voorwaarden van de eerste kristallisatie, of kan opnieuw worden gekristalliseerd bij 22% EtOH met behulp van een zeer kleine hoeveelheid decanol (genoeg om een eindconcentratie van 0,02% te verkrijgen). Merk op dat kristallisatie bij lagere EtOH-concentratie een betere zuivering gaf (d.w.z. door het verwijderen van globulinen en koolhydraten) en een stabieler product opleverde. De herkristallisatie met lage EtOH-concentratie verloopt als volgt: Aan 1 kg fractie V bij -10o tot -15o wordt 500mL 15% EtOH bij -5o toegevoegd, langzaam geroerd tot een uniforme suspensie is gevormd. Aan de 15% EtOH (500 mL) wordt voldoende 0,2M NaHCO3 oplossing (125-150 mL) bij 0o toegevoegd om de pH (1:10 verdunning) op 5,3 te brengen. Er treedt enige temperatuurstijging op en er moet voor worden gezorgd dat de temperatuur Menselijk serumalbumine Voorbereidingsproducten en grondstoffen