Albumina sérica humana Propriedades Químicas,Usos,Produção

Propriedades Químicas

Sólido

Métodos de purificação

Abumina é purificada dissolvendo-a em água de condutividade e passando a 2-4o através de duas colunas de permuta iónica, cada uma contendo um 2:1 mistura de resinas aniónicas e catiónicas (Amberlite IR-120, forma H, Amberlite IRA-400, forma OH). Este tratamento remove os íons e as impurezas lipídicas. Cuidados são tomados para excluir CO2, e a solução é armazenada a -15o. A remoção mais completa dos lípidos é obtida através da liofilização da solução desionizada, cobrindo a albumina seca (soro humano) com uma mistura de ácido acético glacial a 5% (v/v) em iso-octano (previamente seco com Na2SO4) e permitindo que fique a 0o (sem agitação) por mais de 6 horas antes de decantar e descartar a mistura de extracção, lavando com iso-octano, re-extraindo, e finalmente lavando duas vezes com iso-octano. A albumina purificada é seca sob vácuo durante várias horas, depois dialisada contra a água durante 12-24 horas à temperatura ambiente, liofilizada, e armazenada a -10oC . Foi recristalizada em soluções de EtOH altas (35%) e baixas (22%) a partir da Fracção V de Cohn: A 1kg de pasta de albumina Fraction V a -5o é adicionado 300mL de 0,4 M de pH (pH 5,5) de tampão acetato em 35% EtOH pré-resfriado a -10o e 430 mL de NaOAc 0,1 M em 25% EtOH também a -10o. Os melhores resultados são obtidos pela adição de todo o tampão e cerca de metade do NaOAc e agitando lentamente durante 1 hora. O resto do NaOAc é adicionado quando todos os grumos se tiverem desintegrado. A mistura é colocada de lado a -5o durante vários dias para cristalizar. Adiciona-se então 35% de EtOH (1 L) para diluir a suspensão cristalina e baixar a força iónica antes da centrifugação a -5o (rendimento de 80%). Os cristais são dissolvidos em 1,5 volumes de 15% EtOH/0,02M NaCl a -5o e clarificados por filtração através de terra de diatomáceas lavadas e calcinadas. Esta solução pode ser recristalizada reajustando-se às condições da primeira cristalização, ou pode ser recristalizada a 22% de EtOH com a ajuda de uma quantidade muito pequena de decanol (suficiente para dar uma concentração final de 0,02%). Note-se que a cristalização a partir de uma menor concentração de EtOH deu uma melhor purificação (isto é, removendo globulinas e carboidratos) e produzindo um produto mais estável. A baixa recristalização de EtOH é a seguinte: A 1kg de Fraction V a -10o a -15o é adicionado 500mL de 15% de EtOH a -5o, mexendo-se lentamente até que se forme uma suspensão uniforme. Aos 15% de EtOH (500mL) adiciona-se uma solução de NaHCO3 0.2M suficiente (125-150mL) a 0o para levar o pH (diluição de 1:10) a 5.3. Ocorre algum aumento de temperatura, e deve-se ter o cuidado de manter a temperatura Produtos de preparação de albumina de soro humano e Matérias-primas