Humanserumalbumin Chemische Eigenschaften,Verwendung,Herstellung

Chemische Eigenschaften

fest

Reinigungsmethoden

Albumin wird gereinigt, indem es in leitfähigem Wasser gelöst und bei 2-4o durch zwei Ionenaustauschersäulen geleitet wird, die jeweils eine 2:1 Mischung aus anionischen und kationischen Harzen (Amberlite IR-120, H-Form, Amberlite IRA-400, OH-Form). Durch diese Behandlung werden Ionen und Lipidverunreinigungen entfernt. Es wird darauf geachtet, dass CO2 ausgeschlossen wird, und die Lösung wird bei -15o gelagert. Eine vollständigere Lipidentfernung wird erreicht, indem die entionisierte Lösung gefriergetrocknet wird, das getrocknete Albumin (Humanserum) mit einem Gemisch aus 5 % Eisessig (v/v) in Iso-Oktan (zuvor mit Na2SO4 getrocknet) bedeckt und bei 0o (ohne Rühren) mindestens 6 Stunden stehen gelassen wird, bevor das Extraktionsgemisch dekantiert und verworfen wird, mit Iso-Oktan gewaschen, erneut extrahiert und schließlich zweimal mit Iso-Oktan gewaschen wird. Das gereinigte Albumin wird mehrere Stunden lang unter Vakuum getrocknet, dann 12-24 Stunden lang bei Raumtemperatur gegen Wasser dialysiert, gefriergetrocknet und bei -10 °C gelagert. Es wurde in Lösungen mit hohem (35 %) und niedrigem (22 %) EtOH-Gehalt aus Cohns Fraktion V umkristallisiert. Die Umkristallisierung mit hohem EtOH-Gehalt erfolgt wie folgt: Zu 1 kg Albuminpaste der Fraktion V bei -5o werden 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5) Acetatpuffer in 35 % EtOH, vorgekühlt auf -10o, und 430 ml 0,1 M NaOAc in 25 % EtOH, ebenfalls bei -10o, zugegeben. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn der gesamte Puffer und etwa die Hälfte der NaOAc zugegeben und eine Stunde lang langsam gerührt wird. Der Rest der NaOAc wird zugegeben, wenn sich alle Klumpen aufgelöst haben. Das Gemisch wird mehrere Tage lang bei -5o beiseite gestellt, um zu kristallisieren. Anschließend wird 35 %iges EtOH (1 l) zugegeben, um die kristalline Suspension zu verdünnen und die Ionenstärke zu verringern, bevor bei -5o zentrifugiert wird (Ausbeute 80 %). Die Kristalle werden weiter in 1,5 Volumina 15%iger EtOH/0,02M NaCl bei -5o gelöst und durch Filtration über gewaschene, kalzinierte Diatomeenerde geklärt. Diese Lösung kann durch erneutes Anpassen an die Bedingungen der ersten Kristallisation umkristallisiert werden oder mit Hilfe einer sehr geringen Menge Dekanol (ausreichend für eine Endkonzentration von 0,02 %) bei 22 % EtOH umkristallisiert werden. Es ist zu beachten, dass die Kristallisation bei niedriger EtOH-Konzentration eine bessere Reinigung (d. h. Entfernung von Globulinen und Kohlenhydraten) und ein stabileres Produkt ergibt. Die Umkristallisation mit niedriger EtOH-Konzentration läuft wie folgt ab: Zu 1 kg Fraktion V bei -10o bis -15o werden 500 ml 15%iges EtOH bei -5o zugegeben und langsam gerührt, bis sich eine gleichmäßige Suspension bildet. Zu dem 15%igen EtOH (500mL) wird eine ausreichende Menge 0,2M NaHCO3-Lösung (125-150mL) bei 0o zugegeben, um den pH-Wert (1:10 Verdünnung) auf 5,3 zu bringen. Es kommt zu einem gewissen Temperaturanstieg, und es muss darauf geachtet werden, dass die Temperatur Human Serum Albumin Preparation Products And Raw materials