Einführung

Ein Teil des Sonnenlichts, das den Boden erreicht, umfasst das ultraviolette Spektrum, das sich aus den drei Abschnitten UVC (200-290nm), UVB (290-320nm) und UVA (320-400nm) zusammensetzt. UVC wird von der Erdatmosphäre vollständig absorbiert. Die UVA-Menge, die den Boden erreicht, ist mehr als 20 Mal so hoch wie die UVB-Menge.1 UVA spielt eine wichtige Rolle bei der vorzeitigen Alterung und der Photokarzinogenese. UVA steigert die Freisetzung von Entzündungsfaktoren, einschließlich IL10 aus Keratinozytenzellen. Außerdem erhöht es die Expression von Entzündungsproteinen wie TNFα, IL1α, IL6 und IL8.2,3 UVA spielt eine erhebliche Rolle bei der Entstehung von Mutationen in der mitochondrialen DNA in der menschlichen Haut mit Hilfe von ROS (reaktiven Sauerstoffspitzen). Es verursacht auch eine vorzeitige Hautalterung, indem es eine Mutation in Fibroblastenzellen in der menschlichen Haut erzeugt.4 Die Rolle der erhöhten Expression des p53-Proteins bei der Verursachung der UVA-induzierten Apoptose ist unbestreitbar.5 8-Hydroxy-2′-Desoxyguanin (8-oxoG) ist ein wertvoller Indikator, um die durch UVA verursachten oxidativen DNA-Schäden zu verfolgen, und es kann zu G → T-Transversionen führen.6

Daher ist der Schutz gegen UVA zusammen mit UVB sehr wichtig.

Der UVA-Schutzfaktor (UVA-PF) wird verwendet, um die Wirksamkeit von Sonnenschutzmitteln gegen UVA-Strahlen zu bewerten.

Materialien und Methoden

In dieser Studie wurden die weltweiten Normen im Bereich der UVA-PF-Bestimmung überprüft und verglichen. Vier Normen, nämlich ISO 24443 (bereitgestellt von der Europäischen Union, im Mai 2013), CEN2006 (bereitgestellt von der Europäischen Union, Südafrika und Japan in Brüssel, am 12. Juli 2006), FDA 2007 (bereitgestellt von den Vereinigten Staaten, am 27. August 2007) und FDA 2011 (bereitgestellt von den Vereinigten Staaten, am 17. Juni 2011) haben unterschiedliche Protokolle im Bereich des UVA-Schutzfaktors erstellt. Einige werden mit In-vivo-Methoden behandelt, andere mit In-vitro-Methoden.7-11

Ergebnisse

Aufgrund der Rolle von UVA bei der Entstehung von Hautschäden ist es wichtig, Sonnenschutzmittel zu verwenden, die die Haut sowohl vor UVA als auch vor UVB schützen. In-vitro-Methoden zur UVA-PF-Messung sind aufgrund unterschiedlicher Testbedingungen, wie z. B. unterschiedliche Substrate, unterschiedliche Mengen des aufgetragenen Produkts und unterschiedliche UV-Bestrahlungsdosen, nicht zuverlässig und reproduzierbar.12 Sowohl die FDA-Norm 2007 als auch die CEN-Norm, die den In-vivo-PF-Ansatz einführen, haben Vor- und Nachteile, so dass die Verwendung des jeweils besseren Ansatzes zu besseren Ergebnissen führen kann.

Diskussion

In-vivo-UVA-PF-Bestimmungstestbewertung

Zunächst werden wir die In-vivo-UVA-PF-Bestimmungsmethoden unter Verwendung der sofortigen Pigmentverdunkelung (IPD), der anhaltenden Pigmentverdunkelung (PPD) und des Schutzfaktors A (PFA) durchgehen. In den CEN- und FDA-Normen von 2007 wird die PPD-Methode jedoch nur bei der In-vivo-UVA-PF-Bestimmungsmethode akzeptiert (Tabelle 1).

Tabelle 1 Vergleich der Protokolle für die In-vivo-UVA-PF-Bestimmung

Bei der PPD-Methode werden wie bei der SPF-Messmethode (Sonnenschutzfaktor) Personen, die die Kriterien für den Test erfüllen, in einer bestimmten Anzahl für die Teilnahme ausgewählt. Beim SPF-Test ist der Endpunkt eine erythematische Reaktion im Gegensatz zum PPD-Test, bei dem der Endpunkt die persistente Pigmentverdunkelung der Testunterflächen ist. Die Teststellen und -unterflächen werden in bestimmten Abmessungen blind auf den Körpern der Teilnehmer angelegt. Die Test- und Referenz-Sonnenschutzmittel werden in der festgelegten Menge abgewogen und auf die Haut der Teilnehmer aufgetragen. Dann wird das Produkt nach einer bestimmten Methode auf der Haut verteilt, und es wird gewartet, bis das Produkt getrocknet ist. Die Personen werden auf eine vorher festgelegte Weise im Sitzen oder Liegen auf dem Bauch der UVA-Strahlung ausgesetzt. Nach einer bestimmten Zeit nach der letzten UV-Bestrahlung wird der Grad der dauerhaften Dunkelheit des Pigments als Endpunkt des Tests bewertet, und der UVA-PF wird anhand einer Reihe von Formeln berechnet (die im Abschnitt „Statistiken und Berechnungen“ erörtert werden).

Auswahlkriterien für Teilnehmer

Trotz der in Tabelle 1 genannten Kriterien (FDA 2007 und gemeinsame CEN-Kriterien) enthalten die CEN-Normen weitere Vorsichtsmaßnahmen für die Teilnahme an dem Test.

Die Kriterien für einen gesunden Mann und eine gesunde Frau, die in Frage kommen, umfassen:

• Hauttyp II, III und IV13
• Nicht in den letzten zwei Monaten an einem Sonnentest teilgenommen haben (keine verbleibenden Flecken auf dem Rücken).
• Keine Sonnenexposition auf dem Rücken für mindestens 2 Monate vor der Studie.
• Abwesenheit von Narben oder aktiven Hautläsionen auf den getesteten Bereichen des Rückens.
• Die Testfläche muss einheitlich gefärbt sein, ohne Naevi, Flecken oder solare Lentigo und ohne übermäßige Behaarung.

Das CEN hat auch eine Reihe von Ausschlusskriterien für die Studie festgelegt;

• Probanden, die die vorstehenden Einschlusskriterien nicht erfüllen.
• Schwangere oder stillende Frauen,
• Vorgeschichte von Allergien, photoallergischen, phototoxischen oder anderen abnormen Reaktionen auf Sonnenlicht oder Empfindlichkeit gegenüber kosmetischen Produkten, Toilettenartikeln, Sonnenschutzmitteln, Latex und/oder topischen Arzneimitteln.
• Probanden mit dermatologischen Problemen auf der Testfläche.
• Probanden, die im vorangegangenen Monat Selbstbräunungsprodukte auf dem Rücken verwendet haben.

Das CEN scheint aufgrund der größeren Konsistenz geeigneter für die Auswahl von Personen zu sein.

Teilnehmerzahl

Die FDA 2007 und das CEN verwenden 20 bis 25 Personen bzw. 10 bis 20 Personen. Wie bei anderen klinischen Studien gilt auch hier: je höher die Teilnehmerzahl, desto höher die Testgenauigkeit. Andererseits führt die große Stichprobengröße zu einigen Problemen wie der Handhabung des Protokolls, der Bereitstellung einer ausreichenden Anzahl von Proben und dem Ausscheiden von Probanden.

Referenz-Sonnenschutzformulierungen

Es wird empfohlen, eine Standardprobe zu verwenden, um die Ergebnisse jeder Testprobe zu überprüfen.

Der Test ist gültig, wenn der für das Referenz-Sonnenschutzmittel erhaltene durchschnittliche UVA-PF innerhalb des angegebenen Bereichs liegt. Nach Tabelle 1 sind beide Referenz-Sonnenschutzmittel eine gute Wahl, da ihre UVA-PF-Ergebnisse nahe beieinander liegen und ihre Wirkstoffe zugelassen sind.

Größe der Testflächen und Unterflächen

Wichtig bei der Wahl der Größe der Flächen und Unterflächen ist die Möglichkeit der Verwendung eines Sonnensimulators mit mehreren Quellen. Das bedeutet, dass die Wahl kleinerer Größen für die Standorte und Unterstandorte dazu führen kann, dass mehrere Unterstandorte gleichzeitig der UV-Strahlung ausgesetzt sind. Daher sind die Merkmale der CEN-Norm (für die Größe der Standorte von 30 cm2 und für Unterstandskreise mit einem Durchmesser von 8 mm) in diesem Bereich besser geeignet.

Für die Abstände zwischen den beiden Unterstandskreisen schlägt die FDA 2007 einen Abstand von 1 cm vor. CEN gibt keinen Abstand zwischen den Unterpunkten an, so dass das Merkmal der FDA 2007 für die Abstände zwischen den Unterpunkten beachtlich ist.

Ladungsmenge

Die Ladungsmenge des Test- und des Referenzprodukts wird in nahezu gleicher Höhe bestimmt. CEN schlägt einen Bereich von 2mg/cm2±2,5% vor, und die FDA 2007 schlägt 2mg/cm2 vor, die gleichmäßig geladen und mit einem Fingertropfen verteilt werden sollten. Das Produkt sollte in kleinen Tröpfchen auf der gesamten Testfläche verteilt werden und mit speziellen Bewegungen ausgebreitet werden.

Die Ausbreitungszeit sollte 20 bis 50 s betragen. Die Bereiche, in denen das Produkt geladen wird, sollten zufällig ausgewählt werden.

Wartezeit zwischen dem Auftragen des Sonnenschutzmittels und der UV-Bestrahlung

Die Wartezeit zwischen dem Auftragen des Produkts und der UV-Bestrahlung wird sowohl von der FDA 2007 als auch vom CEN mit mindestens 15 Minuten bzw. 15 bis 30 Minuten angegeben.

Bestrahlungsgerät und regelmäßige Inspektion der Lampe

Tabelle 1 enthält eine Liste der Spezifikationen für das Bestrahlungsgerät für jede der beiden Normen. Was die regelmäßige Inspektion des Geräts anbelangt, so schlagen die FDA 2007 und die CEN-Norm vor, dass die Inspektion alle 6 bzw. 12 Monate durchgeführt wird.

Nach Angaben der FDA 2011 sind die Kalibrierungsdaten von Sonnensimulatoren und ihren UV-Lampen über einen Zeitraum von mehr als einem Jahr stabil; daher sollte die regelmäßige Bewertung des Geräts besser einmal pro Jahr erfolgen.

Belichtungstrend

Wie für den Belichtungstrend in Tabelle 1 gezeigt, ist das Konzept beider Methoden das gleiche.

Zeit und Zustand der MPD-Bewertung

MPD ist die kleinste Menge an UVA-Strahlung, die eine sichtbare greifbare Pigmentierung mit sichtbaren Rändern erzeugt. Wenn die Pigmentschwärzung fixiert ist, wird die MPD visuell bewertet. Für die MPD-Bewertung schlagen CEN und FDA 2007 2 bis 4 bzw. 3 bis 24 Stunden nach der letzten Exposition vor. Die Beurteilung durch das Auge sollte von einem erfahrenen Beobachter unter angemessenen und gleichmäßigen Lichtverhältnissen blind erfolgen. Die FDA stellt fest, dass die Pigmentverdunkelung etwa 3 Stunden oder mehr nach der Bestrahlung am stabilsten zu sein scheint, und schlägt daher vor, diese Beobachtung 3 bis 24 Stunden nach der Bestrahlung durchzuführen. Diese Zeitspanne bietet mehr Flexibilität bei der Testmethode, ohne die Genauigkeit zu beeinträchtigen. Daher scheinen die FDA-Kriterien von 2007 überlegen zu sein.

In vitro UVA-PF-Bestimmungstest Bewertung

Alle In vitro-Methoden basieren auf der Bewertung der UV-Strahlung, die durch eine dünne Schicht Sonnenschutzmittel auf einer rauen Platte hindurchgeht, so dass der UV-Gehalt vor und nach der Exposition gegenüber der kontrollierten Dosis der Strahlungsquelle berechnet wird. In der Phase der Berechnung des UVA-Schutzniveaus legt jedoch jede Norm einen anderen Maßstab fest (Tabelle 2).

Tabelle 2 In vitro UVA-PF-Bestimmungsprotokollvergleich

Die FDA-Norm von 2007 verwendet die modifizierte Diffey-Fraktion, bei der die Fläche unter der UVA1-Absorptionskurve (340 nm bis 400 nm) in den gesamten Absorptionsbereich von UVA und UVB (290 nm bis 400 nm) aufgeteilt wird.14,15 Dennoch hat die FDA 2011 die modifizierte Diffey-Fraktion aus folgenden Gründen abgeschafft:

1. Diese Fraktion schenkt dem UVA1-Bereich beträchtliche Aufmerksamkeit, während dieser Bereich bei der Erzeugung schädlicher Hautwirkungen keine große Rolle spielt.
2. Wenn ein oder mehrere Inhaltsstoffe des Produkts eine hohe Absorption im kurzwelligen UVA2-Bereich und eine geringe oder gar keine Adsorption im UVA1-Bereich bewirken, ergibt sich ein großes Verhältnis, während dieses Produkt kein breites Absorptionsspektrum aufweist.
3. Dieses vorgeschlagene Verhältnis zeigt keinen zuverlässigen Schutz gegen UVA und gilt nirgendwo sonst auf der Welt.
4. Eine Möglichkeit, diesen Anteil zu erhöhen, besteht darin, die hochabsorbierenden Verbindungen im UVA2- und UVB-Bereich zu reduzieren, was jedoch zu einer Verringerung des Schutzniveaus in diesen Bereichen des Spektrums führt (mit anderen Worten, bei einer Erhöhung des Diffey-Anteils sollte der LSF abnehmen).

Die ISO-Norm 24443 berechnet den UVA-Schutzfaktor in Übereinstimmung mit den PPD-Testergebnissen. Die beiden Normen CEN und FDA 2011 halten die Methode der kritischen Wellenlänge für angemessen.

A (λ) ist die mittlere Absorption bei jeder Wellenlänge, und d (λ) ist das Wellenlängenintervall zwischen den einzelnen Berechnungen.

Die kritische Wellenlänge ist die Wellenlänge, bei der der Bereich unter der Absorptionskurve 90 % der Gesamtfläche unter der UV-Absorptionskurve ausmacht.

Die FDA kam zu dem Schluss, dass der begleitende Test der kritischen Wellenlänge (zur Messung des Ausmaßes des UVB- und UVA-Schutzes) und der SPF-Test (zur Messung des Ausmaßes des UVB- und UVA-Schutzes) eine vollständige Messung der Breitspektrumfähigkeit liefern. Damit ein Produkt mit einer Breitspektrumaussage gekennzeichnet werden kann, sollte es eine kritische Wellenlänge von 370 nm oder mehr erzeugen.

Testplatten

Platten spielen als Ladefläche eine Schlüsselrolle im Test. Unter den Platten aus Quarz, einschließlich PMMA (Polymethylmethacrylat), hydratisiertem Kollagen, epidermaler Haut und Transpore-Tape, werden die PMMA-Platten wegen ihrer Neuheit ausgewählt. Die folgenden Gründe sind ausschlaggebend für die Bevorzugung der anderen Plattentypen:

1. Sie ist billiger als Quarz.
2. Sie ist gebrauchsfertig und muss nicht gereinigt oder aufgeraut werden.
3. Es wird seit mehr als zehn Jahren verwendet.

Wenn Platten mit einer Größe von 16 cm2 akzeptable Ergebnisse liefern, ist es nicht notwendig, Platten mit größeren Abmessungen (10,2 cm) zu verwenden. Was den Rauheitsgrad dieser Platten angeht, so schlägt die Norm FDA 2011 Seiten mit einer Rauheit von 2 bis 7 µg vor, und die ISO 24443 bietet eine Rauheit von 6 Mikrometern. Die Wahl einer konstanten Rauheit von 6 µm, die bei all diesen Tests identisch ist, scheint vernünftig zu sein.

Referenz-Sonnenschutzformulierung

Nach Tabelle 2 gibt es nur in der ISO 24443 ein Referenz-Sonnenschutzmittel. Das Referenz-Sonnenschutzmittel S2 bringt einen UVA-PF von 12,7.

Strahlungsquelle

Vor der Messung des Strahlungsdurchgangs durch die mit dem Produkt bedeckten Platten wird für diese Produkte eine Bestrahlungsphase durchgeführt, um die optische Stabilität zu berücksichtigen. Die FDA 2011 ist der Ansicht, dass die Strahlung des Sonnensimulators (von der FDA 2007 vorgeschlagenes Gerät) so gefiltert wird, dass ihre Energie bei Wellenlängen unter 300 nm geringer ist als die Empfindlichkeit des Spektrophotometers, selbst wenn kein Sonnenschutzmittel auf die Platte aufgebracht wird (d. h. die Durchgangsrate beträgt 100 %).

Die FDA 2011 schlägt daher eine Strahlungsquelle vor, die eine kontinuierliche spektrale Verteilung der UV-Strahlung von 290 bis 400 Nanometern erzeugt. Die CEN-Norm schlägt einen mit Filtern ausgestatteten Sonnensimulator vor.

Wellenlängenintervalle zwischen den Messvorgängen

Um den Durchgang der UV-Strahlung bei jeder Wellenlänge zu messen, müssen die Strahlungsintervalle intermittierend sein. Diese Intervalle sind in den Abständen 1nm und 5nm gemäß Tabelle 2 festgelegt. Dies wurde in der FDA 2011 erwähnt: The submissions stated that specifying a smaller interval would produce more accurate results and noted that current spectrometers are capable of making measurements at 1 nm intervals.

The Dynamic Range of the Spectrometer

Dynamic range is one of the indicators to calibrate the UV spectrophotometer. Der dynamische Bereich des Spektrometers muss ausreichen, um den Durchgang von Sonnenschutzmitteln mit hoher Absorption bei allen UV-Wellenlängen (290 nm bis 400 nm) genau zu messen.

Produktbeladungsmenge

Die Menge und das Verfahren der Beladung des rauen Plattenabschnitts mit dem Produkt sind in jeder Norm angegeben. Um die Genauigkeit der Produktbeladung zu gewährleisten, können wir die Pipettengewichtsmessung vor und nach der Beladung oder mit Hilfe des Dichtefaktors verwenden. Das Produkt wird in Tröpfchen gleichen Volumens eingefüllt. Die FDA 2007, CEN und ISO 24443 verwenden einen Wert von 2 und 2 mg/cm2 bzw. 1,3 mg/cm2. Die FDA ist der Ansicht, dass der UV-Durchgang bei einer dicken Schicht von 2 mg/cm2 geringer ist und zu uneinheitlichen Reaktionen führt. Daher hat die FDA die Beladungsmenge auf 0,75 mg/cm2 festgelegt, um sicherzustellen, dass der UV-Durchlassgrad innerhalb des dynamischen Bereichs der UV-Detektoren liegt.

Verteilungsmethode des Produkts

Das gleichmäßige Verteilen des Sonnenschutzmittels auf der Platte beeinflusst die Genauigkeit des Tests erheblich. Wie Tabelle 2 zeigt, kann der Verteilungsprozess entweder einphasig oder zweiphasig mit oder ohne Verwendung eines Fingerhuts erfolgen. Die FDA 2011 hält das zweiphasige Auftragen für eine effektivere Methode, um eine feste und dicke Schicht zu erhalten. Dies trägt zu einer besseren Verteilung für ein breites Spektrum von Arzneiformen bei als die 10-s-Soft-Distributionstechnik und entspricht auch dem tatsächlichen Gebrauch der Verbraucher. Daher scheint die Meinung der FDA 2011 und der ISO 24443 in Bezug auf die Produktverteilung die beste Option zu sein.

Pre-Irradiation Dose

Dieser Vorgang wird durchgeführt, um die Reduzierung der optischen Stabilität zu überprüfen. Das Sonnenschutzmittel wird auf die Platte geladen und dann einer Strahlungsquelle ausgesetzt. Laut FDA 2011 ist die Vorbestrahlungsdosis in Form eines SPF- oder UVA-PF-Anteils nicht logisch, da die Sonneneinstrahlung zu einer bestimmten Zeit und an einem bestimmten Ort auf der Erdoberfläche für Produkte mit hohem oder niedrigem SPF und UVA-PF gleich ist. Daher schlägt die FDA 2011 vor, dass die Dosis vor der Bestrahlung ein konstanter Wert ist. Die FDA erhielt Informationen, aus denen hervorging, dass Produkte, die Avobenzon enthalten, bei einer Dosis, die 2-3 MED (Minimal Erythemal Dose) entspricht, vollständig zerstört werden.

Dies ist das schlimmste Szenario für den optischen Abbau, da Avobenzon das instabilste Sonnenschutzmittel gegen Licht in den Sonnenschutzmittelmonographien ist. 1MED bei Hauttyp 2 entspricht 250 J/m2. Daher wird in der FDA 2011 die Vorbestrahlungsdosis auf 4MED festgelegt, was 800 J/m2 entspricht.

Messung des Strahlungsdurchgangs

Nach der Bestrahlung der Produkte mit der Vorbestrahlungsdosis werden die mit dem Produkt bedeckten Platten zur Messung des Durchgangs in das Spektrophotometer gelegt. Laut FDA-Gutachten von 2011 (5-malige Messung von 3 Seiten), wenn ein zufriedenstellendes Ergebnis mit weniger Berechnungen erzielt wird, dann ist kein weiterer Zeit- und Kostenaufwand erforderlich.

Statistiken und Berechnungen

Nach CEN ergibt sich die kritische Wellenlänge aus der folgenden Formel:

wobei λC die kritische Wellenlänge und MPF der monochromatische Schutzfaktor ist, der der Kehrwert des Transmissionsgrads bei einer bestimmten Wellenlänge ist.

Nach ISO 24443 wird zunächst der individuelle UVA-Schutzfaktor (UVA-PFI) für jede Base (mindestens 4 Basen) nach der folgenden Formel berechnet:

wobei P(λ) das PPD-Wirkungsspektrum ist.

I(λ) ist die von der UVA-Quelle empfangene spektrale Bestrahlungsstärke.

Ae(λ) ist die mittlere monochromatische Absorption der Testproduktschicht nach UV-Bestrahlung.

d(λ) ist der Wellenlängenschritt (1 nm).

C ist der Anpassungskoeffizient. Die anfänglichen Werte der Absorptionskurve werden mit einem skalaren Wert „C“ multipliziert, bis die in vitro berechneten SPF-Werte mit dem in vivo gemessenen SPF übereinstimmen. Dies geschieht in einem iterativen Berechnungsprozess. Die mit diesem „C“-Wert multiplizierten anfänglichen Absorptionswerte ergeben die angepasste Absorptionskurve des Sonnenschutzmittels, die zur Bestimmung des anfänglichen UVA-PF0-Wertes und der Expositionsdosis verwendet wird. Der „C“-Wert liegt typischerweise zwischen 0,8 und 1,6, um eine gültige Interpretation zu ermöglichen. Liegt er außerhalb dieses Bereichs, sollten neue Proben vorbereitet werden, um die ursprünglichen Beobachtungen zu validieren.

So wird nach der folgenden Formel der durchschnittliche UVA-PF berechnet:

Wenn diese Bedingung Vertrauensintervall (CI) n erfüllt ist, ist der Test gültig; andernfalls sollte die Anzahl der Basen erhöht werden, solange die Bedingung erfüllt ist.

Ist die genannte Bedingung nach Verwendung von 10 Basen nicht erfüllt, wird der Test für ungültig erklärt.

Nach den Normen der FDA 2011 und FDA 2007 wird die UV-Durchlässigkeit nach folgender Formel berechnet:

Messungen der spektralen Bestrahlungsstärke, die für jede Wellenlänge durch mit 15 µl Glycerin beschichtete PMMA-Kontrollplatten hindurchgeht.

Messungen der spektralen Bestrahlungsstärke, die für jede Wellenlänge λ durch die mit dem Sonnenschutzmittel beschichtete PMMA-Platte hindurchgeht. Die durchschnittliche Absorption bei jeder Wellenlänge () wird aus dem negativen Logarithmus des mittleren UV-Durchgangs wie folgt berechnet:

Nach der FDA 2011 wird die kritische Wellenlänge aus dieser Formel berechnet;

Nach der FDA 2007 wird das Diffey-Fraktionsverhältnis wie folgt berechnet:

UVA I-Fläche pro Einheit λ wird wie folgt angegeben:

UV-Fläche pro Einheit λ wird wie folgt angegeben:

Schlussfolgerung

Aufgrund der Rolle von UVA bei der Entstehung von Hautschäden erscheint die Verwendung von Sonnenschutzmitteln, die die Haut vor UVA und UVB schützen, unerlässlich. Zur Bewertung des UVA-PF wird die In-vivo-Methode aufgrund ihrer Präzision und Wiederholbarkeit sowie der Simulation der tatsächlichen Anwendungsbedingungen beim Menschen bevorzugt. Sowohl die FDA 2007 als auch die CEN-Normen, die den In-vivo-PPD-Ansatz einführen, haben Vor- und Nachteile, so dass die Anwendung des jeweils besseren Ansatzes zu besseren Ergebnissen führen kann.