ihmisen seerumin albumiini Kemialliset ominaisuudet,käyttö,valmistus

Kemialliset ominaisuudet

kiinteä

Puhdistusmenetelmät

Albumiini puhdistetaan liuottamalla se johtokykyiseen veteen ja kuljettamalla se 2-4o:n lämpötilassa kahden ioninvaihtokolonnin läpi, joista kumpikin sisältää 2:1 anionisten ja kationisten hartsien seosta (Amberlite IR-120, H-muoto, Amberlite IRA-400, OH-muoto). Tämä käsittely poistaa ionit ja lipidien epäpuhtaudet. Hiilidioksidi suljetaan pois, ja liuos säilytetään -15o C:ssa. Täydellisempi lipidien poisto saavutetaan lyofilisoimalla ionivaihdettu liuos, peittämällä kuivattu albumiini (ihmisen seerumi) seoksella, jossa on 5-prosenttista jääetikkaa (v/v) iso-oktaanissa (joka on aiemmin kuivattu Na2SO4:lla), ja antamalla sen seistä 0o:n lämpötilassa (ilman sekoittamista) vähintään 6 tuntia, ennen kuin se dekantoidaan ja uuttoseos heitetään pois, pestään iso-oktaanilla, uutetaan uudestaan ja pestään lopuksi kahdesti iso-oktaanilla. Puhdistettu albumiini kuivataan tyhjiössä useita tunteja, dialysoidaan sitten vettä vastaan 12-24 tuntia huoneenlämmössä, lyofilisoidaan ja säilytetään -10oC:ssa. Se on uudelleenkiteytetty korkeassa (35 %) ja matalassa (22 %) EtOH-liuoksessa Cohnin fraktiosta V. Korkeassa EtOH-liuoksessa uudelleenkiteytys on seuraava: 1 kg:aan Fraktio V:n albumiinipastaa, jonka lämpötila on -5o, lisätään 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5) asetaattipuskuria 35 %:n EtOH:ssa, joka on esijäähdytetty -10o:n lämpötilaan, ja 430 ml 0,1 M NaOAc:ta 25 %:n EtOH:ssa, jonka lämpötila on myös -10o. Parhaat tulokset saadaan lisäämällä koko puskuri ja noin puolet NaOAc:sta ja sekoittamalla hitaasti 1 tunnin ajan. Loput NaOAc:sta lisätään, kun kaikki kokkareet ovat hajonneet. Seos asetetaan sivuun -5o:n lämpötilaan useiksi päiviksi kiteytymään. Tämän jälkeen lisätään 35-prosenttista EtOH:ta (1 l) kiteisen suspension laimentamiseksi ja ionivahvuuden alentamiseksi ennen sentrifugointia -5o:ssa (saanto 80 %). Kiteet liuotetaan edelleen 1,5 tilavuuteen 15-prosenttista EtOH:ta/0,02M NaCl:ää -5o:ssa ja selkeytetään suodattamalla pestyn, kalsinoidun diatomiinimullan läpi. Tämä liuos voidaan kiteyttää uudelleen säätämällä se uudelleen ensimmäisen kiteytyksen olosuhteisiin tai se voidaan kiteyttää uudelleen 22-prosenttisessa EtOH:ssa hyvin pienen dekanolimäärän avulla (tarpeeksi, jotta loppupitoisuus on 0,02 %). On huomattava, että kiteyttäminen pienemmästä EtOH-pitoisuudesta johti parempaan puhdistukseen (eli globuliinien ja hiilihydraattien poistamiseen) ja tuotti vakaamman tuotteen. Matalassa EtOH-pitoisuudessa tapahtuva uudelleenkiteytys on seuraava: 1 kg:aan fraktiota V, jonka lämpötila on -10o – -15o, lisätään 500 ml 15 % EtOH:ta, jonka lämpötila on -5o, ja sekoitetaan hitaasti, kunnes muodostuu tasainen suspensio. 15-prosenttiseen EtOH:hon (500 ml) lisätään 0o:ssa riittävästi 0,2M NaHCO3-liuosta (125-150 ml), jotta pH (laimennos 1:10) saadaan 5,3:een. Lämpötila nousee jonkin verran, ja on huolehdittava siitä, että lämpötila säilyy Ihmisen seerumin albumiini Valmistus Tuotteet ja raaka-aineet