Discussion

Tässä tutkimuksessa tunnistettiin useita kollateraalisten EC:iden ja SMC:iden erityispiirteitä, jotka voivat olla collateraalisten verisuonten ainutlaatuisten ominaisuuksien taustalla tai myötävaikuttaa niiden ainutlaatuisiin ominaisuuksiin, jotka on esitetty johdannossa. Havaitsimme, että huolimatta alhaisesta ja oskilloivasta leikkausjännityksestä, joka esiintyy kollateraaleissa lähtötilanteessa ilman tukkeutumista, niiden EC:t ovat samassa määrin linjassa aluksen akselin kanssa kuin distaalisimmissa arterioleissa ja laskevassa aortassa – verisuonissa, joissa on suurnopeuksinen ortogradinen laminaarinen virtaus. Sekä kollateraalien että arteriolien endoteelisoluissa on primaarisia värekarvoja, ja kollateraaleissa niitä on vähemmän. Kollateraalien sileät lihassolut ovat jatkuvia, toisin kuin DMA:n solut. Kollateraaleissa ilmentyy enemmän geenejä, jotka liittyvät sekä pro- ja anti-inflammatorisiin että pro- ja anti-proliferaatiopolkuihin, verrattuna DMA:han. Sitä, että kollateraalien seinämäsolujen solujen proliferaatio on nopeampaa, tukee havainto, jonka mukaan kollateraalit alkavat saada mutkaisuutta pian alkion muodostumisensa jälkeen, joka lisääntyy keski-ikään asti (16 kuukautta, 49 ihmisvuosiekvivalenttia ). Edellä mainitut havainnot tarjoavat tietoa rakenteellisista ja molekulaarisista erikoistumisista, jotka voivat olla kollateraalisuonten ainutlaatuisten ominaisuuksien ja toimintojen taustalla.

Verivirtauksen konvergenssi kollateraaleissa lähtötilanteessa aiheuttaa niiden muraalisoluille alhaisia ja ”häiriintyneitä” virtaus/säröjännitysvoimia eli joko virtauksen puuttumista tai hyvin vähäistä virtausta, joka värähtelee edestakaisin (~1-10 kertaa minuutissa) ja keskimäärin nolla . Tämä johtaa seinämäjännityksen lisääntymiseen Bernoullin suhteen mukaisesti. Kun sitä esiintyy muualla valtimoverenkierrossa, esimerkiksi haarautumiskohdissa, aortan sisäkaaressa tai plakkien alapuolella, alhainen ja häiriintynyt leikkausjännitys suosii epäkeskeistä mukulakivimorfologiaa, joka liittyy lisääntyneeseen oksidatiiviseen stressiin, tulehdukseen, ikääntymisen merkkiaineisiin ja alhaiseen eNOS/NO-aktiivisuuteen (eli endoteelin toimintahäiriöön) . Yllättäen havaitsimme kuitenkin, että kollateraalisilla EC:llä on sama linjaus (ja solujen mitat) kuin EC:llä DMA:ssa ja laskevassa aortassa. Emme tutkineet, miten tämä anti-inflammatorinen rakenteellinen fenotyyppi on määritelty. On mahdollista, että siihen liittyy yksi tai useampi muista tunnistamistamme ainutlaatuisista piirteistä (ks. jäljempänä). Toisaalta kuvassa 2 esitetyt virtausta ja leikkausjännitystä koskevat tiedot on saatu nukutetuilla eläimillä. Hereilläolon aikana kollateraaleilla voi olla jaksoja, jolloin virtaus on pysyvää jompaankumpaan suuntaan, minkä aiheuttavat muutokset alueellisessa metabolisessa aktiivisuudessa alueella, jota niiden ristikytkemät valtimopuut syöttävät. Ei tiedetä, vaikuttavatko kollateraalit tällä tavoin verenkierron ja hapensaannin fysiologiseen metaboliseen säätelyyn, eli neurovaskulaariseen kytkentään aivoissa ja funktionaaliseen hyperemiaan muualla. Tällaiset jatkuvat yksisuuntaisen virtauksen jaksot voisivat kuitenkin edistää havaitsemaamme EY:n suuntautumista. Riippumatta taustalla olevasta syystä spekuloimme, että kollateraalisten EY:iden kohdistettu fenotyyppi on osa (tai merkki) suojamekanismien ryhmästä, joka suosii kollateraalien ylläpitoa ja lieventää niiden harvinaistumista (kuva 9).

Tietojemme mukaan tämä on ensimmäinen raportti, jossa osoitetaan, että kollateraaleja ja arterioleja reunustavilla EC:llä on primaarisia värekarvoja. Ne ovat paljon runsaampia kuin aiemmin on raportoitu terveiden henkilöiden johtosäiliöaluksista (eli puuttuvat tai ovat läsnä alle 1 prosentissa EC: stä ): 18 prosentilla kollateraalisista EC: stä on PrC verrattuna 28 prosenttiin DMA: ssa. Haust kuvasi vuonna 1984 EC:n primaariset värekarvat kaniinien ja ihmisten ateroskleroosista kärsivissä aorteissa. Myöhemmissä raporteissa on kuvattu säikeisiä EC:itä 20 viikon ikäisen ihmissikiön käpyrauhasen kapillaareissa , kehittyvissä sydämen ja aorttaläpän läppäviipaleissa (ks. viitteet), ateroomien ympärillä, ektooppisesti ApoE-/- -hiirten yhteisessä kaulavaltimossa ja terveillä yksilöillä kanavoitujen valtimoiden haarautumiskohdissa ja aortan kaaren sisemmissä kaarevissa kohdissa; päinvastoin, säikeisiä EC:itä ei esiinny lainkaan tai ei juuri lainkaan sellaisilla valtimoiden alueilla, joissa leikkausjännitys on laminaarista. Useimmat muut solutyypit ilmentävät PrC:tä kehityksen aikana, tietyissä soluviljelyolosuhteissa ja aikuisilla . Solutyypistä riippuen PrC osallistuu alkion epäsymmetrian spesifikaatioon, sentriolien sijoitteluun, proliferaation/solusyklin säätelyyn, autofagiaan, virtauksen havaitsevaan mekanotransduktioon, kemoseptiikkaan sekä signalointiproteiinien lokerointiin ja kulkeutumiseen cilioplasman, sytoplasman ja nukleoplasman välille (esim. Gli:n ja PDGFRα:n osalta) . Kun piilejä on olemassa, niitä on eniten ei-proliferoivissa soluissa, ja niiden proksimaalinen pää on ankkuroituneena plasmalemman invaginaatioon (piikkitasku) EY:ssä ja muissa mutta ei kaikissa solutyypeissä . Primaariset värekarvat ovat kompleksissa tyvirungon emosentriolin kanssa, joka on yhteydessä mikrotubuluksia organisoivaan keskukseen (MTOC, microtubule-organizing center) . Ciliumin purkautuminen/resorptio S-vaiheen aikana ja sentriolin vapautuminen ovat välttämättömiä solun jakautumiselle . Koska PrC on yhteydessä sytoskelettiin MTOC:n kautta, virtauksen aiheuttama sädekehän taipuminen EY:ssä pystyy välittymään koko soluun, myös solu-solu- ja solumatriisiliitoksiin . Primaariset värekarvat välittävät nesteen leikkausstressiä munuaistubulusten epiteelisoluissa ja EY:ssä polun kautta, joka on poikkeuksellisen herkkä leikkausstressille ja johon osallistuvat Pkd1:n ja Pkd2:n koodaamat polykystiini-1 ja polykystiini-2 . Polykystiini-1:llä on mekanosensitiivisiä ominaisuuksia, kun taas polykystiini-2 on TRP-kalsiumkanava. Molempia proteiineja tarvitaan aistimaan leikkausstressiä ja vapauttamaan typpioksidia . PrC:n viat liittyvät moniin poikkeavuuksiin. Esimerkiksi PKD1:n ja PKD2:n mutaatiot ovat syynä autosomaaliseen dominoivaan polykystiseen munuaistautiin, jossa potilaiden munuaisten EC- ja tubulaarisoluissa esiintyy puutteellisia kalsium- ja NO-vasteita ja lisääntynyttä proliferaatiota .

Primääriset värekarvat puuttuvat ihmisen napanuoran laskimoiden EC-soluista, joita ylläpidetään laminaarisen leikkausstressin ja proliferatiivisen hiljaisuuden vallitessa soluviljelmässä. Ihmisen napasuonissa alle yhdellä prosentilla EK:ista on lumeniin työntyviä värekarvoja, kun taas suuremmalla osalla värekarvoja on solunsisäisesti . Alkion aortassa ja siitä viljellyissä EC-soluissa on vain yksi luumeniin työntyvä säie . Endoteelin värekarvoja esiintyy alueilla, joilla on alkionkehityksen aikana suuri leikkausstressi, sekä leikkausstressille herkän KLF2-transkriptiotekijän ilmentyminen, joka transaktivoi eNOS:ää ja muita anti-inflammatorisia ja antiproliferatiivisia geenejä . Alueilla, joilla leikkausstressi on alhainen tai häiriintynyt, PrC hajoaa/puuttuu ja Klf2:n ja eNOS:n ilmentyminen häviää ja vähenee vastaavasti . Klf2:n ilmentyminen estyy myös alkion valtimoista eristetyissä ei-hilseilevissä EK:issa, ja PrC:n kemiallisella poistamisella kulttuurissa olevista EK:ista on samanlainen vaikutus eli Klf2:n ilmentymisen poistuminen . Mielenkiintoista on, että aikuisten ApoE-/-hiirten, joilla on endoteelin toimintahäiriö, mutta joille ei kehity plakkeja, EC:ssä ilmentyvät ripset ektooppisesti yhteisessä kaulavaltimossa laminaarivirtauksesta huolimatta, verrattuna villityyppisiin hiiriin, joilla ei ole ripsiä . Cilia hävisi, kun verisuonen ympärille istutettiin virtausta rajoittava valukappale, joka aiheutti suuren leikkausjännityksen. Yhteisten kaulavaltimoiden valaminen villityyppisillä hiirillä indusoi ciliogeneesin vain alueilla, joilla leikkausstressi oli alhainen ja häiriintynyt. Nämä havainnot viittaavat siihen, että PrC:n ilmentyminen EC:ssä in vivo aikuisilla rajoittuu alueille, joilla leikkausjännitys on alhainen/häiriöinen, mutta sitä voi esiintyä ektooppisesti valtimoissa, joissa on laminaarinen virtaus hyperlipidemian ja mahdollisesti muiden verisuonten riskitekijöiden aiheuttaman endoteelin toimintahäiriön vallitessa. Huomionarvoista on, että voimakkaasti säikeistetyillä, häiriintyneen virtauksen alueilla, kuten aortan kaaren sisemmällä kaarevuudella tai plakkien alapuolella, noin 25 prosentilla EY:stä on yksi säie, kun taas loput ovat vailla säiettä, mikä on samankaltainen prosenttiosuus kuin mitä havaitsimme arterioleissa ja kollateraaleissa.

Havaintomme, että PrC:tä esiintyy myös arterioleissa ja kollateraaleissa terveillä nuorilla aikuisilla hiirillä, korostavat tarvetta tutkimuksiin, joissa tutkitaan värekarvojen toimintaa näissä verisuonityypeissä. Tähän sisältyy sen määrittäminen, onko havainnollamme, jonka mukaan kollateraalien EC:ssä on vähemmän värekarvoja kuin arterioleissa, toiminnallista merkitystä. Endoteelisolut ovat mekaanisesti, sähköisesti ja diffuusiokytköksissä viereisiin EY:n ja SMC:n soluihin, joten vain murto-osan EY:n soluista saattaa olla tarpeen ilmentää värekarvoja mekaanisesti herkkien tai muiden signaalien välittämistä varten. Korkea leikkausjännitys aiheuttaa värekarvojen hajoamisen viljellyissä EY:ssä, kun taas värähtelevä virtauksen kääntäminen indusoi niiden ilmentymisen . Arvelemme, että arterioleissa ja kollateraalisissa EY:ssä olevat värekarvat saattavat heijastaa matalampaa virtausta/leikkausjännitystä arterioleissa ja hyvin matalaa ja häiriintynyttä virtausta kollateraalisissa EY:ssä ja että vähemmän PrC:tä kollateraalisissa EY:ssä saattaa vähentää niiden herkkyyttä vallitsevalle häiriintyneelle leikkausjännitysympäristölle. Toisin sanoen kollateraalisten EK:iden vähemmän värekarvoja voi olla osa sopeutumisrepertuaaria, joka tasapainottaa tai vastustaa – KLF2/4:n, eNOS:n ja muiden anti-inflammatoristen/antiproliferatiivisten tekijöiden jatkuvan tai lisääntyneen ilmentymisen kautta – matala-asteisia tulehduksellisia, oksidatiivisia, proliferatiivisia ja apoptoottisia signaaleja, joita kollateraaleissa esiintyvä häiriintynyt hemodynaaminen ympäristö edistää (kuva 9). Egorova et al. ehdottivat jotakin samankaltaista, eli että koska PrC:n läsnäolo EY:ssä liittyy KLF2-ekspressioon, endoteelin värekarvat voivat antaa signaalin EY:n aktivaation jarruttamisesta alueilla, joilla virtaus on vähäistä ja häiriintynyttä. Hilseiden suojaavaa roolia näillä alueilla tukee äskettäinen raportti, jonka mukaan endoteelin värekarvojen poistaminen Ift88:n ehdollisen poiston avulla lisäsi ateroskleroosia ja tulehdusgeenien ilmentymistä ja vähensi eNOS-aktiivisuutta Apoe-/- -hiirillä, joita ruokittiin runsaasti rasvaa sisältävällä ruokavaliolla , ja että endoteeli herkistyy ateroalttiilla alueilla osteogeeniselle erilaistumiselle Tg737 (orpk/orpk) -värekarvojen kanssa defektoiduissa hiirissä . On myös mahdollista, että jos PrC:t ovat suojaavia, niiden vähäisempi määrä kollateraalisissa verisuonissa voi osaltaan vaikuttaa näiden verisuonten suureen alttiuteen ikääntymisen ja muiden verisuonten riskitekijöiden aiheuttamalle harvinaistumiselle. Vähemmän värekarvoja kollateraaleissa saattaa kuitenkin yksinkertaisesti heijastaa toissijaista tai sivullisvaikutusta, joka on seurausta esimerkiksi kollateraalisten EK:iden suuremmasta luontaisesta proliferaatiovauhdista, kuten kollateraalisen mutkaisuuden asteittainen lisääntyminen osoittaa (jota käsitellään jäljempänä), koska PrC:n läsnäolon ja niiden liittymisen tyvirunkoon uskotaan suosivan solujen poistumista solusyklistä . Tulevia tutkimuksia tarvitaan sen määrittämiseksi, heijastaako havaintomme EC-solujen useista värekarvoista EC-soluja, jotka ovat läpikäyneet proliferatiivisen senesenssin ja siihen liittyvän epäonnistuneen sytokineesin ja ydinpolyploidian .

Viime aikoina on osoitettu, että hiiren kehittyvän verkkokalvon EC:t tukeutuvat PrC:hen stabiloidakseen verisuoniyhteyksiä verisuonipleksin uudelleenmuodostuksen aikana alueilla, joilla leikkausstressi on matala tai keskinkertainen . Endoteelisilia aistii virtauksen seeprakalojen alkioissa, osallistuu muraalisolujen rekrytointiin valtimoiden fatiittisiin verisuoniin, ja sitä tarvitaan normaaliin verisuonten morfogeneesiin . Kollateraalien määrä ja halkaisija vähenevät keski-iässä . Tätä iän aiheuttamaa harvinaistumista kiihdyttää voimakkaasti geneettinen tai farmakologisesti indusoitu eNOS/NO-puutos tai verisuonten riskitekijöiden esiintyminen . Lisääntynyt leikkausjännitys saa aikaan kollateraalien ulospäin suuntautuvan uudelleenmuodostuksen akuutin tai hitaasti kehittyvän valtimotukoksen jälkeen . Pkd1+/- hiirillä ja potilailla, joilla on autosomaalinen dominoiva polykystinen munuaissairaus, on endoteelin eNOS/NO-häiriö . Tulevissa tutkimuksissa on tärkeää tutkia, osallistuuko kollateraalinen PrC yhteen tai useampaan edellä mainituista toiminnoista käyttämällä EY-spesifistä polykystiini-1:n knockdownia, koska : 2) polykystiini-1 yhdessä polykystiini-2:n kanssa osallistuu PrC:n virtauksen havaitsemiseen, 3) kumman tahansa proteiinin mutaatiomuodot aiheuttavat polykystistä munuaistautia , 4) on näyttöä siitä, että VHL, riippumatta sen roolista Hif1α:n hajoamisessa, on yksi niistä, yhdessä GSK3β:n kanssa tarvitaan sädekehän rakenteelliseen ylläpitoon , ja 5) proteiini Rabep2 , jota tarvitaan kollaterogeneesiin , on GSK3β:n uusi substraatti , lokalisoituu sädekehä-perusrunko-kompleksiin ja sen tyrmäys johtaa puutteelliseen sädekehän syntyyn . On myös tutkittava muita lähestymistapoja, joilla voidaan puuttua sädekehän läsnäoloon ja toimintaan, esimerkiksi muiden sädekehäproteiinien, kuten Pkd2:n ja Ift88:n, tyrmäämisellä.

Toisin kuin distaalisissa arterioleissa, joissa on harvaa ja epäjatkuvaa SMC:tä eri kudoksissa, mukaan lukien verkkokalvo (emme pystyneet tunnistamaan tutkimuksia aivoissa) , SMC:t olivat jatkuvia kollateraaleissa. Spekuloimme, että kyseessä voi olla seinämän paksuuden adaptiivinen lisääntyminen, jolla tasapainotetaan seinämän ympärysmittaisen jännityksen lisääntymistä, joka johtuu Bernoullin määrittelemästä virtauksen kineettisen energian muuntumisesta lisääntyneeksi potentiaalienergiaksi (transmuraalinen paine), joka on seurausta virtauksen konvergenssista kollateraaleissa. Olisi mielenkiintoista tutkia, eroavatko solunulkoisen matriisin koostumus ja määrä, joka voisi auttaa SMC:tä tasapainottamaan lisääntynyttä seinämäjännitystä kollateraaleissa, kollateraaleissa ja arterioleissa. Huomattakoon, että lisääntyneestä SMC-peittävyydestään huolimatta kollateraaleilla on pikemminkin vähemmän kuin enemmän sävyä verrattuna samankokoisiin arteriooleihin, ja niiltä puuttuu myogeeninen reagointikyky – ylimääräisiä ainutlaatuisia ominaisuuksia kollateraalisäiliöissä .

Häiriintynyt hemodynaaminen, pro-oksidatiivinen ympäristö, jossa kollateraaliset seinämäsolut asuvat, johti meidät tutkimaan, onko inflammaatioon, solujen proliferaatioon, ikääntymiseen ja verisuonten angiogeneesiin osallistuvien geenien ilmentyminen erilainen kollateraaleissa verrattuna distaalisiin valtimoihin. Kollateraalit osoittivat lisääntyneitä mRNA-tasoja pro-inflammatoriselle, pro-apoptoosia edistävälle inflammasomigeenille Pycardille, pro-proliferatiivisille geeneille Ki67, Pdgfb ja Angpt2, anti-proliferatiiviselle geenille Dll4 ja erilaistuneen valtimotyyppisen EY:n merkkigeenille Ephrinb2:lle. Solusyklin inhibiittorigeenien, p21, p27 ja p53, ilmentyminen ei kuitenkaan eronnut, kuten ei myöskään muiden proliferaatioon, solusyklin pysähtymiseen ja ikääntymiseen liittyvien geenien (p16Ink4a, Ampk, Sirt1, telomeraasi). Eroja ei ollut myöskään muiden sellaisten geenien ilmentymisessä, jotka liittyvät EY:n ja/tai SMC:n proliferaatioon (Vegfa, Flk1, Clic4, Pdgfa, Flt1) ja jotka ovat välttämättömiä (kolmen ensin mainitun geenin tapauksessa) kollateraalien muodostumiselle kehityksen aikana tai jotka osallistuvat EY:n ja SMC:n erilaistumisen ja lepotilan määrittelyyn (Tgfb, Angpt1). Edellä mainittujen proliferaatiota edistävien geenien lisääntynyt ilmentyminen kollateraalisissa verisuonissa on sopusoinnussa mutkaisuusmittaustemme kanssa, jotka viittaavat siihen, että kollateraalisilla seinämäsoluilla on muihin valtimosuoniin verrattuna korkeampi proliferaatiovauhti: kollateraalisten verisuonten mutkaisuus näkyi ensimmäisenä päivänä syntymän jälkeen, jatkoi lisääntymistään keski-ikään asti ja väheni sitten. Jälkimmäinen tapahtui samaan aikaan, kun kollateraalien määrä ja halkaisija vähenevät pitkälle edenneen ikääntymisen myötä. Nämä havainnot tukevat hypoteesia, jonka mukaan iän aiheuttama kollateraalien harvinaistuminen johtuu kollateraalien EY:n ja SMC:n proliferatiivisesta vanhenemisesta ja sitä seuraavasta apoptoosista, joka johtuu eliniän aikana tapahtuvasta lisääntymisnopeuden kohoamisesta, joka johtuu häiriintyneestä hemodynamiikasta ja alhaisesta veren happipitoisuudesta ympäristössä, jossa kollateraalit sijaitsevat (kuva 9).

Kollateraaleissa näkyi myös eNOS:n lisääntynyttä aktiivisuutta, jonka aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet vastustavan ikääntymisen ja muiden verisuonten riskitekijöiden aiheuttamaa kollateraalien harvinaistumista . eNOS:stä peräisin oleva NO estää oksidatiivista stressiä, tulehdusta, proliferaatiota, leukosyyttien adheesiota, verihiutaleiden aggregaatiota ja solujen ikääntymistä ja edistää SMC:n relaksaatiota . Koska leikkausjännitys on eNOS:sta peräisin olevan NO:n lähiärsyke, lisääntynyt eNOS/NO kollateraalissa, jossa leikkausjännitysympäristö on alhainen ja häiriintynyt, voi vähentää kollateraalin harvenemista edistävien tekijöiden vaikutusta (kuva 9). Samoin EY:n leikkausrasitukselle herkkien transkriptiotekijöiden, Klf2:n ja Klf4:n, ylläpidetty ilmentyminen kollateraaleissa niiden matalasta ja värähtelevästä virtauksesta huolimatta, mikä estää näiden tekijöiden ilmentymisen muualla valtimovaltimoiden verisuonistossa, jossa virtaus on häiriintynyt, voi toimia ylimääräisinä ”tasapainottavina” tekijöinä tai kollateraalien erikoistumisina yhdessä lisääntyneen eNOS:n, linjautuneiden EY:iden, vähäisempien värekarvojen, vankan SMC:n peittävyyden ja lisääntyneen efriini-B2:n ja Dll4:n kanssa. KLF2: n ja KLF4: n ilmentyminen, jotka säätelevät negatiivisesti proliferaatiota, tulehdusta ja angiogeneesiä, säätelevät eNOS: ää ja ovat jyrkästi alasreguloituja alhaisen ja häiriintyneen leikkausjännityksen paikoissa, eivät eronneet kollateraaleissa verrattuna DMA: iin. Mielenkiintoista on, että PrC edistää Klf2:n, Klf4:n ja eNOS:n ilmentymistä .

Yllämainittujen tutkimusten rajoituksena on se, että RNA:ta saatiin leikatuista verisuonista, jotka koostuvat EC:stä, SMC:stä ja, vaikkakin vähemmässä määrin, perisyyteistä, fibroblasteista ja paikalleen jäävistä myelooisista soluista. Tarvitaan tutkimuksia, joissa käytetään solutyyppien erottelua ja tutkitaan laajempaa joukkoa geenejä ja niiden proteiinitasoja. Näiden lähestymistapojen käyttö on kuitenkin mahdotonta, koska kollateraalien ja distaalisten arteriolien irrottaminen manuaalisesti tarvittavassa määrin, solujen erottelutekniikoiden vaikutus RNA:n ja proteiinien lähtötasoihin, ”kollateraalisten” EY:n ja SMC:n soluviljelymallien puuttuminen ja toistaiseksi kollateraalispesifisten merkkigeenien puuttuminen estävät näiden lähestymistapojen käytön. Huomionarvoista on kuitenkin, että useiden tutkittujen geenien ilmentyminen on spesifistä tai rikastunutta EY:lle, esim. Flk1, Angpt1, Angpt2, Ephrinb2, DLL4, eNOS, Clic4, Klf2 ja Klf4. Geenien transkription analyysi ei kuitenkaan aina heijasta muutoksia proteiinien tasossa tai toiminnassa; näin ollen oksidatiivisen stressin, tulehduksen, proliferaation tai senesenssin markkereiden tutkiminen proteiinitasolla saattaa kuvastaa paremmin eroja solujen ominaisuuksissa.