Albina serică umană Proprietăți chimice, utilizări, producție

Proprietăți chimice

solide

Metode de purificare

Albumina se purifică prin dizolvare în apă de conductivitate și trecere la 2-4o prin două coloane de schimb de ioni, fiecare conținând o coloană de 2:1 amestec de rășini anionice și cationice (Amberlite IR-120, forma H, Amberlite IRA-400, forma OH). Acest tratament îndepărtează ionii și impuritățile lipidice. Se are grijă să se excludă CO2, iar soluția este depozitată la -15o. O eliminare mai completă a lipidelor se obține prin liofilizarea soluției dezionizate, acoperirea albuminei uscate (ser uman) cu un amestec de acid acetic glacial 5% (v/v) în izooctan (uscat în prealabil cu Na2SO4) și lăsarea la 0o (fără agitare) timp de peste 6 ore înainte de a decanta și a arunca amestecul de extracție, de a spăla cu izooctan, de a reextrage și, în final, de a spăla de două ori cu izooctan. Albumina purificată se usucă în vid timp de câteva ore, apoi se dializează cu apă timp de 12-24 de ore la temperatura camerei, se liofilizează și se depozitează la -10oC . Aceasta a fost recristalizată în soluții cu conținut ridicat (35%) și scăzut (22%) de EtOH din fracția V a lui Cohn. Recristalizarea cu conținut ridicat de EtOH se face după cum urmează: La 1 kg de pastă de albumină din Fracția V la -5o se adaugă 300 ml de soluție tampon de acetat cu pH 0,4 M (pH 5,5) în 35% EtOH răcit în prealabil la -10o și 430 ml de NaOAc 0,1 M în 25% EtOH, de asemenea la -10o. Cele mai bune rezultate se obțin adăugând tot tamponul și aproximativ jumătate din NaOAc și agitând lent timp de 1 oră. Restul de NaOAc se adaugă atunci când toți cocoloașele s-au dezintegrat. Amestecul se pune deoparte la -5o timp de câteva zile pentru a cristaliza. Se adaugă apoi EtOH 35% (1 L) pentru a dilua suspensia cristalină și a reduce forța ionică înainte de centrifugare la -5o (randament 80%). Cristalele se dizolvă în continuare în 1,5 volume de 15% EtOH/0,02M NaCl la -5o și se clarifică prin filtrare prin pământ de diatomee spălat și calcinat. Această soluție poate fi recristalizată prin readaptarea la condițiile din prima cristalizare sau poate fi recristalizată la 22% EtOH cu ajutorul unei cantități foarte mici de decanol (suficient pentru a obține o concentrație finală de 0,02%). Rețineți că cristalizarea la o concentrație mai mică de EtOH a permis o mai bună purificare (adică prin eliminarea globulinelor și a carbohidraților) și obținerea unui produs mai stabil. Recristalizarea cu concentrație scăzută de EtOH se face după cum urmează: La 1 kg de fracție V la -10o până la -15o se adaugă 500 ml de EtOH 15% la -5o și se agită încet până când se formează o suspensie uniformă. La 15% EtOH (500mL) se adaugă o cantitate suficientă de soluție de NaHCO3 0,2M (125-150mL) la 0o pentru a aduce pH-ul (diluție 1:10) la 5,3. Are loc o oarecare creștere a temperaturii și trebuie avut grijă să se mențină temperatura Albumina serică umană Produse de preparare și materii prime