Cuantificarea deplasării la stânga a leucocitelor

Cele mai timpurii tipuri de neutrofile recunoscute morfologic sunt mieloblastul, promielocitele și mielocitele. Aceste celule se maturizează în metamiocite, apoi în benzi și, în final, în neutrofile segmentate (Fig. 7.4). Mieloblastele, promielocitele și mielocitele sunt capabile de diviziune celulară, după cum se evidențiază prin încorporarea timidinei tritiate în ADN-ul lor nuclear și se verifică prin observare directă în cultură.22,23 Aceste trei stadii timpurii ale neutrofilelor sunt denumite colectiv compartimentul mitotic al neutrofilelor sau fondul proliferativ al neutrofilelor. În timpul infecției, compartimentul mitotic al neutrofilelor adaugă de obicei una sau două diviziuni celulare suplimentare, extinzând astfel dimensiunea bazinului proliferativ.23 Adăugarea unei diviziuni suplimentare dublează numărul de neutrofile mature produse. În timpul infecției, numărul de promielocite și mielocite din măduva osoasă crește de obicei din cauza diviziunilor celulare adăugate.24

Dezechilibrarea la stânga a neutrofilelor este o expresie utilizată pentru a indica o creștere anormală a neutrofilelor imature în circulație.25-27 O metodă de cuantificare a deplasării spre stânga, în special în hematologia neonatală, este raportul neutrofile imature/total (I/T).25-30 Un mecanism de livrare a mai multor neutrofile către țesuturile infectate este eliberarea prematură a neutrofilelor imature postmitotice (metamilocite și benzi) din măduvă în circulație. Acest lucru duce la creșterea raportului.26,31-35

Raportul neutrofilelor I/T necesită o numărătoare diferențială manuală a celulelor; un tehnolog de hematologie examinează la microscop 100 de leucocite pe o peliculă de sânge colorată, enumerând fiecare celulă în funcție de caracteristicile morfologice. Raportul I/T este calculat de obicei ca fiind procentul de neutrofile în bandă plus metamiocite împărțit la procentul de neutrofile segmentate plus neutrofile în bandă plus metamiocite. O a doua metodă obișnuită de cuantificare a deplasării spre stânga este numărătoarea absolută a benzilor, care necesită, de asemenea, o diferențială manuală. Procentul de leucocite identificate ca benzi este înmulțit cu numărul de leucocite, iar valoarea este exprimată ca benzi/μL de sânge.36 Fiabilitatea raportului I/T este afectată de diferențele mari între observatori în ceea ce privește clasificarea neutrofilelor ca benzi sau forme segmentate.29

Contul diferențial automatizat al leucocitelor este o inovație relativ nouă în hematologia clinică de laborator; un număr mare de leucocite sunt clasificate prin tehnici citometrice în flux în funcție de dimensiunea și caracteristicile citoplasmatice și nucleare.4,28,37 O mică fracțiune de promielocite, mielocite și metamelocite scapă din măduvă și se găsesc în sânge, iar acestea pot fi măsurate de anumite analizoare de hematologie. Într-o numărătoare celulară diferențială automată pe unele modele de analizoare de hematologie Sysmex, deplasarea spre stânga este cuantificată de granulocitele imature (IG). Aceste rezultate pot fi raportate ca procent de granulocite imature (IG%) sau număr absolut de granulocite imature (IG/μL). IG% și IG/μL sunt oarecum analoge, dar distincte din punct de vedere tehnic, de raportul neutrofile I/T și de numărul absolut de benzi. Diferențialele automatizate au avantajul de a nu necesita un frotiu de sânge sau timpul tehnicianului pentru a efectua o analiză microscopică.4,5 Mai mult, a fost raportată o performanță îmbunătățită a diferențialului automatizat față de metodele manuale la populațiile adulte, pe baza unui eșantion mult mai mare de leucocite numărate. De asemenea, eroarea umană este eliminată în discriminarea între tipurile de celule, deoarece atribuirea tipului de celule este determinată automat prin tehnici de gating prestabilite.38 Fig. 7.5 prezintă canalul diferențialului de leucocite (WDF) produs de analizoarele Sysmex.6

În multe laboratoare clinice, numărătorile diferențiale automate au înlocuit numărătorile manuale pentru pacienții adulți.5,39 O barieră în calea adoptării diferențialelor automate de leucocite în neonatologie a fost lipsa unor intervale de referință pentru IG% și IG/μL la populațiile neonatale.40 De asemenea, utilitatea IG% și IG/μL ca biomarkeri pentru infecție nu a fost comparată direct cu raportul I/T neutrofile și cu numărul absolut de benzi la nou-născuții infectați față de cei neinfectați.

Intervalele de referință (limitele inferioare și superioare ale percentilei a 5-a și a 95-a) pentru IG% și IG/μL au fost dezvoltate folosind hemogramele nou-născuților fără semne de infecție. Fig. 7.6 oferă diagrame cu intervale de referință pentru IG% și IG/μL pentru prima săptămână după naștere.41

Cele patru metode de cuantificare a deplasării spre stânga au avut performanțe statistice similare pentru a sugera diagnosticul de infecție (tabelul 7.1). Pentru fiecare dintre cele patru, sensibilitatea a fost slabă (12%-15%), în timp ce specificitatea a fost puternică (90%-95%), iar valoarea predictivă pozitivă (PPV) și valoarea predictivă negativă (NPV) au fost, în mod obișnuit, de la valori mici până la medii de 60 %. Combinațiile celor patru au avut tendința de a diminua sensibilitatea, dar au crescut VPP.41

Raportul neutrofilelor I/T nu este o metodă sensibilă de identificare a infecției, dar o valoare ridicată este destul de specifică pentru infecție. IG/μL și numărul de benzi au avut performanțe similare cu raportul I/T și IG%. Aceste constatări ne-au determinat să concluzionăm că, în majoritatea scopurilor, o diferențială automatizată ar trebui să servească la fel de bine ca o diferențială manuală, similar concluziilor trase în cazul hemogramelor obținute de la adulți.39,42 Mai mult, am găsit trei numărători diferențiale manuale care aveau ceea ce am presupus a fi erori de transpoziție (benzi plasate în coloana seg, și invers). Aceste cazuri aveau rapoarte I/T extraordinar de ridicate (>0,8), dar pacienții păreau bine, iar când hemogramele au fost repetate imediat, rapoartele I/T au fost normale (<0,2). Astfel de erori nu ar avea loc cu numărătorile diferențiale automatizate.

CBC cu diferențialul leucocitar este unul dintre cele mai frecvente teste de laborator comandate la nou-născuți și sugari mici. Concluzionăm că, ca modalitate de cuantificare a deplasării la stânga a leucocitelor, IG% și IG/μL de la o numărătoare diferențială automatizată pe analizorul hematologic Sysmex sunt comparabile cu raportul I/T și numărul absolut de benzi bazat pe o numărătoare diferențială manuală, deși valorile IG și I/T corelează slab. Leucocitele diferențiale automatizate care utilizează alte tipuri de numărătoare de celule ar trebui, de asemenea, să fie comparate cu numărătorile diferențiale manuale. Concluzionăm că o numărătoare diferențială automată ar trebui să fie suficientă pentru medicina neonatală. Pentru nou-născuții selectați la care identificarea infecției este scopul hemogramei, adăugarea unei numărători diferențiale manuale ar putea îmbunătăți ușor performanța testului.

.