Humant serumalbumin Kemiska egenskaper, användning, produktion

Kemiska egenskaper

fast

Reningsmetoder

Albumin renas genom att det löses upp i konduktivt vatten och passerar vid 2-4o genom två jonbyteskolonner som vardera innehåller en 2:1 blandning av anjoniska och katjoniska hartser (Amberlite IR-120, H-form, Amberlite IRA-400, OH-form). Denna behandling avlägsnar joner och lipidföroreningar. Man är noga med att utesluta koldioxid och lösningen förvaras vid -15o C. En mer fullständig avskiljning av lipiderna uppnås genom att den avjoniserade lösningen fryses, det torkade albuminet (humanserum) täcks med en blandning av 5 % ättiksyra (v/v) i isoktan (som tidigare torkats med Na2SO4) och får stå vid 0o (utan omrörning) i mer än 6 timmar innan extraktionsblandningen dekanteras och kasseras, sköljs med isoktan, extraheras på nytt och slutligen sköljs två gånger med isoktan. Det renade albuminet torkas under vakuum i flera timmar och dialyseras sedan mot vatten i 12-24 timmar i rumstemperatur, lyofiliseras och lagras vid -10oC . Det har omkristalliserats i höga (35 %) och låga (22 %) EtOH-lösningar från Cohns fraktion V. Omkristalliseringen i höga EtOH-lösningar är följande: Till 1 kg albuminpasta från fraktion V vid -5o tillsätts 300 ml 0,4 M pH (pH 5,5) acetatbuffert i 35 % EtOH som förkylts till -10o och 430 ml 0,1 M NaOAc i 25 % EtOH också vid -10o. Bäst resultat får man genom att tillsätta all buffert och ungefär hälften av NaOAc och röra långsamt i en timme. Resten av NaOAc tillsätts när alla klumpar har upplösts. Blandningen ställs åt sidan vid -5o i flera dagar för att kristallisera. 35 % EtOH (1 liter) tillsätts sedan för att späda ut den kristallina suspensionen och sänka jonstyrkan före centrifugering vid -5o (utbyte 80 %). Kristallerna löses vidare i 1,5 volymer 15 % EtOH/0,02 M NaCl vid -5o och förtydligas genom filtrering genom tvättad, kalcinerad diatoméjord. Denna lösning kan omkristalliseras genom att återigen anpassa den till förhållandena vid den första kristalliseringen, eller så kan den omkristalliseras vid 22 % EtOH med hjälp av en mycket liten mängd dekanol (tillräckligt för att ge en slutkoncentration på 0,02 %). Observera att kristallisering vid lägre EtOH-koncentration gav bättre rening (dvs. genom att avlägsna globuliner och kolhydrater) och gav en stabilare produkt. Omkristalliseringen med låg EtOH-koncentration är följande: Till 1 kg av fraktion V vid -10o till -15o tillsätts 500 ml 15 % EtOH vid -5o och rörs långsamt tills en jämn suspension bildas. Till den 15-procentiga EtOH-lösningen (500 ml) tillsätts tillräckligt med 0,2 M NaHCO3-lösning (125-150 ml) vid 0o för att pH-värdet (utspädning 1:10) ska bli 5,3. En viss temperaturhöjning inträffar och man måste se till att hålla temperaturen humanserumalbumin Beredning Produkter och råvaror