Albumina surowicy ludzkiej Właściwości chemiczne, zastosowania, produkcja

Właściwości chemiczne

ciało stałe

Metody oczyszczania

Albumina jest oczyszczana przez rozpuszczenie jej w wodzie o odpowiedniej przewodności i przepuszczenie w temperaturze 2-4o przez dwie kolumny jonowymienne, każda zawierająca 2:1 mieszaninę żywic anionowych i kationowych (Amberlite IR-120, H-form, Amberlite IRA-400, OH -form). Obróbka ta usuwa jony i zanieczyszczenia lipidowe. Zwraca się uwagę na wykluczenie CO2, a roztwór przechowywany jest w temperaturze -15o. Pełniejsze usunięcie lipidów uzyskuje się poprzez liofilizację zdejonizowanego roztworu, pokrycie wysuszonej albuminy (surowica ludzka) mieszaniną 5% lodowatego kwasu octowego (v/v) w izooktanie (uprzednio wysuszoną za pomocą Na2SO4) i pozostawienie jej w temperaturze 0o (bez mieszania) na ponad 6 godzin przed dekantacją i odrzuceniem mieszaniny ekstrakcyjnej, przemycie izooktanem, ponowną ekstrakcję i w końcu dwukrotne przemycie izooktanem. Oczyszczona albumina jest suszona w próżni przez kilka godzin, następnie dializowana z wodą przez 12-24 godziny w temperaturze pokojowej, liofilizowana i przechowywana w temperaturze -10oC. Poddano ją rekrystalizacji w roztworach wysokiego (35%) i niskiego (22%) EtOH z frakcji V Cohna. Rekrystalizacja w roztworze wysokiego EtOH przebiega następująco: do 1 kg pasty albuminowej Frakcji V w temperaturze -5o dodaje się 300 mL 0,4 M pH (pH 5,5) buforu octanowego w 35% EtOH wstępnie schłodzonego do temperatury -10o oraz 430 mL 0,1 M NaOAc w 25% EtOH również w temperaturze -10o. Najlepsze wyniki uzyskuje się przez dodanie całego buforu i około połowy NaOAc i mieszanie powoli przez 1 godzinę. Reszta NaOAc jest dodawana, gdy wszystkie grudki się rozpadną. Mieszaninę odstawia się na kilka dni w temperaturze -5o w celu skrystalizowania. Następnie dodaje się 35% EtOH (1 L) w celu rozcieńczenia krystalicznej zawiesiny i obniżenia siły jonowej przed odwirowaniem w temperaturze -5o (wydajność 80%). Kryształy są dalej rozpuszczane w 1,5 objętości 15% EtOH/0,02M NaCl w temperaturze -5o i klarowane przez filtrację przez przemytą, kalcynowaną ziemię okrzemkową. Roztwór ten może być rekrystalizowany przez ponowne dostosowanie do warunków pierwszej krystalizacji lub może być rekrystalizowany w 22% EtOH z pomocą bardzo małej ilości dekanolu (wystarczającej do uzyskania końcowego stężenia 0,02%). Należy zauważyć, że krystalizacja z niższego stężenia EtOH dała lepsze oczyszczenie (tj. przez usunięcie globulin i węglowodanów) i wytworzenie bardziej stabilnego produktu. Rekrystalizacja z niskiego stężenia EtOH przebiega w następujący sposób: do 1kg Frakcji V o temperaturze -10o do -15o dodaje się 500mL 15% EtOH o temperaturze -5o, miesza się powoli aż do powstania jednolitej zawiesiny. Do 15% EtOH (500mL) dodaje się wystarczającą ilość 0,2M roztworu NaHCO3 (125-150mL) w temperaturze 0o , aby doprowadzić pH (rozcieńczenie 1:10) do 5,3. Następuje pewien wzrost temperatury i należy uważać, aby utrzymać temperaturę Albumina surowicy ludzkiej Preparaty i surowce