W ciągu ostatnich kilku lat egzotyczne gady cieszyły się rosnącą popularnością jako zwierzęta domowe. Ten wzrost popularności doprowadził do zwiększenia liczby zakażeń salmonellą związanych z gadami, które występują każdego roku w Stanach Zjednoczonych (obecnie szacuje się je na 93 000) (4; J. Mermin, L. Hutwagner, D. Vugia, P. Kirley, J. Bender, J. Koehler, T. McGivern, R. Marcus, F. Angulo, and the FoodNet Working Group, 36th Annu. Meet. Infect. Dis. Soc. Am., 1998 ). Dzieci poniżej 10 roku życia oraz osoby z obniżoną odpornością wydają się być szczególnie podatne na zakażenia Salmonella spp. związane z gadami i często doświadczają ciężkiego przebiegu klinicznego, w tym przypadków śmiertelnych z powodu posocznicy i zapalenia opon mózgowych (2, 4). Z tego powodu w 1975 r. rząd Stanów Zjednoczonych zakazał handlu żółwiami o pancerzach mniejszych niż 4 cale od przodu do tyłu. Środek ten doprowadził do 77% redukcji salmonellozy związanej z żółwiami (5). Jednakże, z powodu rosnącej popularności egzotycznych gadów jako zwierząt domowych, częstość występowania salmonellozy związanej z gadami wciąż wzrasta. Na przykład, izolacja Salmonella enterica subsp. houtenae serovar Marina od ludzi wzrosła z 2 przypadków w 1989 r. do 47 przypadków w 1998 r., a liczba przypadków S. enterica serovar Poona wzrosła z 199 w 1989 r. do 341 w 1998 r. (3). Główne serotypy wyizolowane od pacjentów z salmonellozą związaną z gadami obejmują serotypy S. enterica subsp. diarizonae (IIIb), S. enterica subsp. houtenae (IV) serotypy Chameleon i Marina, oraz S. enterica subsp. enterica (I) serotypy Java, Stanley i Poona (1). Bardzo często żółwie i legwany, które często są wypuszczane na wolność w domach hodowców i służą jako zwierzęta domowe dla dzieci, były identyfikowane jako źródła zakażenia ludzi. Ponadto, węże zbożowe, pytony i boa również zostały zidentyfikowane jako źródła zakażeń Salmonella (1, 4, 5). Suszone preparaty z grzechotnika stosowane w medycynie ludowej doprowadziły do ciężkich infekcji Salmonella ze skutkiem śmiertelnym (7, 11).

Ale różne gady, takie jak legwany, żółwie i węże, zostały retrospektywnie opisane jako źródła salmonellozy u ludzi (5, 8, 11), nie jest jasne, jak często niektóre gatunki gadów są kolonizowane przez gatunki Salmonella. Dlatego też przeprowadziliśmy prospektywne badania przesiewowe próbek kału od dwóch grup hodowlanych węży na obecność Salmonelli.

Aby ocenić występowanie Salmonelli, świeże próbki kału zostały pobrane od 10 żmij nosorożców (Bitis nasicornis, Shaw 1802) i 6 żmij rzęsistych (Bothriechis schlegelii, Berthold 1846) za pomocą wymazówki i natychmiast przetworzone zgodnie ze standardowym protokołem wykrywania patogenów jelitowych. Protokół ten jest zgodny z zaleceniami Niemieckiego Towarzystwa Higieny i Mikrobiologii i obejmuje użycie nieselektywnego agaru z krwią, agaru MacConkey, bulionu wzbogaconego Selenitem oraz agarów selektywnych dla Salmonelli: agaru Salmonella-shigella i agaru ksylozowo-lizynowo-deoksycholanowego. Wszystkie płytki agarowe inkubowano przez 48 h w temperaturze 37°C. Po 24 i 48 godzinach sprawdzano płytki agarowe pod kątem wzrostu Salmonelli. Bulion wzbogacający inkubowano przez 18 h w 37°C, a następnie przenoszono na agar Salmonella-shigella i agar ksylozowo-lizyno-dezoksycholanowy, które inkubowano w 37°C przez kolejne 24 h. Identyfikację przeprowadzono przy użyciu systemów identyfikacyjnych API E (BioMerieux, Lyon, Francja). Określanie serotypów przeprowadzono metodą aglutynacji bezpośredniej na mikroslajdach (6) w Krajowym Ośrodku Referencyjnym dla Patogenów Jelitowych (Institut für Hygiene und Umwelt, Hamburg, Niemcy). Generowanie antysurowic przeprowadzono poprzez immunizację królików nowozelandzkich zgodnie z wytycznymi Światowej Organizacji Zdrowia (9). Do elektroforezy w żelu pulsacyjnym (PFGE), genomowe DNA trawiono przy użyciu XbaI. Powstałe fragmenty były rozdzielane w 1% żelu agarozowym przy użyciu systemu CHEF DR III (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Calif.). Czasy impulsów wynosiły od 5 do 35 s w ciągu 32 h przy napięciu 6 V i temperaturze 14°C. Żele barwiono etylenem. Żele barwiono bromkiem etydyny, odbarwiano w wodzie destylowanej i fotografowano w świetle UV. Profile PFGE analizowano zgodnie z ustalonymi kryteriami przedstawionymi przez Tenover i współpracowników (10).

Szczepy Salmonella grupy serologicznej IIIb zostały wyizolowane z próbek kału wszystkich węży B. nasicornis i trzech z sześciu węży B. schlegelii. Przegląd wyników serologicznego typowania jest przedstawiony w Tabeli 1.1. Ogółem wyizolowano 12 serotypów Salmonella serogrupy IIIb, przy czym 48:i:z był jedynym serotypem izolowanym od różnych węży. Próbki kontrolne zostały uzyskane od czterech zwierząt w okresie od 1 do 22 miesięcy. Wszystkie z tych węży były trwale skolonizowane przez szczepy Salmonella serogrupy IIIb. Określanie serotypów ujawniło identyczne szczepy u węża 5 B. nasicornis przez cały okres obserwacji (Tabela (Tabela1).1). Tożsamość klonalną tych szczepów wykazano metodą PFGE (ryc. (ryc. 1).1). U pozostałych trzech węży stwierdzono zmiany kolonizujących serotypów Salmonella w trakcie obserwacji (Tabela (Tabela 1).1). Wąż 2 B. nasicornis wykazał zmianę z serotypu Salmonella 17:l,v:z35 na serotyp Salmonella 48:i:z w ciągu 1 miesiąca. Szczep ten był identyczny z izolowanym od B. nasicornis snake 3, co wykazano metodą PFGE (Rys. (Rys.1).1). Identyczne klony Salmonella serotyp 48:i:z, które różniły się od tych wyizolowanych od węży B. nasicornis, znaleziono również u dwóch węży B. schlegelii (Rys. (Rys.1).1). Wynik ten może być spowodowany faktem, że dwa węże B. nasicornis, jak również dwa węże B. schlegelii, z tym serotypem były trzymane razem przed tym badaniem w celach hodowlanych. Wszystkie inne zwierzęta badane w tym badaniu były zawsze trzymane pojedynczo w oddzielnych klatkach. Analiza PFGE szczepu Salmonella serotyp 48:i:z wyizolowanego od węża B. nasicornis 10 wykazała inny wzór prążkowania.