Kat. č. Y51	OF Base Medium, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
Kat. č. Y57	OF Dextrose, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/krabička
Kat. čís. Y58	OF Fructose, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
Kat. čís. Y54	OF Lactose, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
Kat. č. Y52	OF Maltose, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
Kat. čís. Y53	OF Mannitol, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
Kat. č. Y55	OF sacharóza, 13x100mm zkumavka, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box
kat. č. Y56	OF Xylose, 13x100mm Tube, 3ml	20 nebo 100 zkumavek/box

URČENÍ

Hardy Diagnostics OF Basal Medium se doporučuje pro detekci oxidace nebo fermentace sacharidů bakteriemi.

SHRNUTÍ

OF Basal Medium bylo vyvinuto Hughem a Leifsonem na pomoc při identifikaci gramnegativních bakterií na základě jejich schopnosti oxidovat nebo fermentovat specifický sacharid. (6)

Ve srovnání s jinými OF médii používá vzorec Hugha a Leifsona nízký poměr pepton/sacharid a minimální množství agaru. Snížené množství peptonu snižuje tvorbu alkalických aminů, které mohou v konečném důsledku maskovat malá množství kyselin, jež mohou vznikat oxidačním metabolismem. (5) Zvýšené množství sacharidů má za následek zvýšení množství kyseliny, která se může tvořit. Malé množství agaru přidaného do média vytváří polotuhou strukturu, která koncentruje kyselinu v místě reakce, čímž usnadňuje vizuální interpretaci změny pH.

Správné provedení testu OF vyžaduje, aby byl organismus naočkován do dvou zkumavek každého média OF. Po naočkování se jedna zkumavka překryje minerálním olejem nebo roztaveným parafínem. Druhá zkumavka se ponechá otevřená vzduchu.

Oxidační využití sacharidů vede k produkci kyseliny (žluté) pouze v otevřené zkumavce. Fermentativní využití sacharidů vede k produkci kyseliny (žluté) v otevřené i uzavřené trubici. Kyselé změny v překrytých zkumavkách se považují za důsledek skutečné fermentace, zatímco kyselý vývoj v otevřených zkumavkách je způsoben oxidačním využitím přítomného sacharidu. Asacharolytické organismy nevytvářejí kyseliny ani v jedné ze zkumavek.

FORMULÁŘ

Složení na litr deionizované vody:*

Chlorid sodný	5.0gm
Pankreatický digest kaseinu	2,0gm
Fosforečnan draselný	0.3gm
Bromothymolová modř	0,08gm
Agar	2,0gm

Navíc OF médium se sacharidy obsahuje 10,0gm/l specifických sacharidů.

Konečné pH 6,8 +/- 0,2 při 25 °C.

* Upraveno a/nebo doplněno podle potřeby tak, aby splňovalo výkonnostní kritéria.

SKLADOVÁNÍ A SKLADOVACÍ DOBA

Skladování: Po obdržení skladujte při teplotě 2-8 °C. (kromě kat. č. Y51, skladujte při teplotě 2-30ºC) mimo dosah přímého světla. Média by se neměla používat, pokud vykazují známky kontaminace, znehodnocení nebo pokud uplynula doba použitelnosti. Produkt je citlivý na světlo a teplotu; chraňte jej před světlem, nadměrným teplem a mrazem.

PŘEDPOKLADY

Odběr vzorků: Sběr vzorků není použitelný, protože toto médium není určeno k primární izolaci z klinických vzorků. Obecně platí, že infekční materiál by měl být neprodleně předán přímo do laboratoře a chráněn před nadměrným teplem a chladem. Pokud má dojít ke zpoždění při zpracování, měl by být vzorek naočkován na vhodné transportní médium a až do naočkování uchováván v chladu. Informace o odběru vzorků naleznete v uvedených referencích. (1-5)

Způsob použití:

1. Nechte média vyrovnat na pokojovou teplotu.

2. Získejte čisté, izolované kolonie z 18-24hodinové kultury.

3. Pro každý testovaný organismus naočkujte zkumavky ve dvou opakováních. Inokulaci proveďte zapíchnutím do agaru do vzdálenosti přibližně 1/4 palce ode dna.

4. Do jedné z každé duplikátní zkumavky naneste sterilní minerální olej, sterilní roztavený parafín nebo sterilní roztavenou vazelínu. Utáhněte uzávěr překryté zkumavky a uvolněte uzávěr nepokryté zkumavky.

5. Obě zkumavky inkubujte aerobně při 35 °C po dobu až 14 dnů.

6. Zkumavky denně prohlížejte.

7. Kontrolní zkumavka se základním médiem OF (kat. č. Y51) by měla být naočkována a inkubována souběžně s testy OF.

INTERPRETACE VÝSLEDKŮ

Pozitivní test na využití sacharidů je indikován vznikem žluté barvy v médiu.

Negativní test na využití sacharidů je indikován absencí žlutého zbarvení (médium zůstává zelené nebo se zmodrá).

Způsob metabolismu se stanoví následujícím způsobem:

Využití sacharidů	Otevřená zkumavka (bez překrytí)	Uzavřená zkumavka (překrytí olejem)
Oxidace		Pozitivní (žlutá)	Negativní (zelená)
Kvašení	Pozitivní (žlutá)	Pozitivní (žlutá)
Ne-oxidace/nefermentace	Negativní (zelená nebo modrá)	Negativní (zelená)
Oxidace i fermentace	Pozitivní (žlutá)	Pozitivní (žlutá)

Pozn: Barevné reakce by měly být porovnány s OF Base Medium (kat. č. Y51) kontrolní zkumavkou.

OMEZENÍ

Organismy, které oxidují pouze dextrózu, nebudou fermentovat žádný jiný sacharid. Ostatní sacharidy budou pouze oxidovat. Překrytou (uzavřenou) zkumavku lze proto při stanovení využití jiných sacharidů u takových organismů vynechat.

Některé mikroorganismy nerostou v základním médiu OF. K potvrzení negativní reakce může být nutné použít jiné bazální médium obsahující dextrózu.

Některé minerální oleje jsou kyselé a mohou vést k chybným výsledkům.

POTŘEBNÝ, ALE NEPŘEDÁVANÝ MATERIÁL

Standardní mikrobiologické potřeby a vybavení, jako jsou smyčky, jiná kultivační média, tampony, sterilní minerální olej, aplikační tyčinky, spalovače a inkubátory atd. a také sérologická a biochemická činidla, se nedodávají.

KONTROLA KVALITY

.

Testované organismy	Způsob inokulace*	Inkubace			Výsledky
		Čas	Teplota	Atmosféra
Základní médium:
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-48h	35°C	Aerobní	Růst; beze změny barvy (horní část může po 48 hodinách zmodrat) v otevřené zkumavce a ve zkumavce překryté olejem
OF Dextróza:
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce a plyn v otevřené zkumavce a ve zkumavce překryté olejem
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené zkumavce; beze změny ve zkumavce překryté olejem
OF fruktózy:
Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883	D	18-24h	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst, negativní fermentace a oxidace – zelená
OF laktózy:
Enterobacter cloacae ATCC® 23355	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; negativní oxidace a fermentace-zelená
OF maltóza:
Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hr	35°C	Aerobní	Růst; žádná změna barvy v obou zkumavkách
OF Mannitol:
Enterococcus faecalis ATCC® 29212	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst: kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst, negativní oxidační a fermentační reakce – zelená
Sacharóza:
Enterobacter aerogenes ATCC® 13048	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; negativní oxidace a fermentace – zelená
O xylóze:
Enterobacter aerogenes ATCC® 13048	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; kyselá (žlutá) reakce v otevřené a olejem překryté zkumavce
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hod	35°C	Aerobní	Růst; negativní oxidace a fermentace – zelená

1. Anderson, N.L., et al. Cumitech 3B; Quality Systems in the Clinical Microbiology Laboratory, Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

2. Srov. Jorgensen. et al. Manual of Clinical Microbiology, American Society for Microbiology, Washington, D.C.

3. Tille, P., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.

4. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook, Vol. I, II & III. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

5. Americká společnost pro mikrobiologii. Koneman, E.W., et al. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.

6. Barevný atlas a učebnice diagnostické mikrobiologie. Hugh, R. and Leifson, E.J. 1953: Hugh, R. and Leifson, E.J. 1953. Bacteriol.; 66:24-26.

ATCC je registrovaná ochranná známka společnosti American Type Culture Collection.

IFU-10625

.