Posted on

OXIDATIVE-FERMENTATIVE MEDIUM (OF BASAL MEDIUM)

, Author

Cat. no. Y51 OF Base Medium, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y57 OF Dekstroosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y58 OF Fruktoosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y54 OF Laktoosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y52 OF Maltoosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y53 OF Mannitoli, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y55 OF Sakkaroosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko
Cat. no. Y56 OF Ksyloosi, 13x100mm putki, 3ml 20 tai 100 putkea/laatikko

TARKOITETTU KÄYTTÖÖNOTTO

Hardy Diagnostics OF-perusmediumia suositellaan bakteerien suorittaman hiilihydraattien hapettumisen tai fermentoitumisen osoittamiseen.

TIIVISTELMÄ

Hugh ja Leifson kehittivät OF Basal Mediumin auttamaan gramnegatiivisten bakteerien tunnistamisessa niiden kyvyn perusteella hapettaa tai fermentoida tiettyä hiilihydraattia. (6)

Verrattuna muihin OF-medioihin Hughin ja Leifsonin kaavassa käytetään pientä peptoni/hiilihydraattisuhdetta ja minimaalista agarmäärää. Pienempi peptonimäärä vähentää emäksisten amiinien muodostumista, jotka voivat viime kädessä peittää hapetusmetaboliasta mahdollisesti syntyvät pienet happomäärät. (5) Lisääntynyt hiilihydraatti johtaa siihen, että mahdollisesti muodostuvan hapon määrä kasvaa. Väliaineeseen lisätty pieni määrä agaria muodostaa puolikiinteän rakenteen, joka keskittää hapon reaktiokohtaan, mikä helpottaa pH-arvon muutoksen visuaalista tulkintaa.

OF-testin asianmukainen suorittaminen edellyttää, että organismi inokuloidaan kahteen putkeen kutakin OF-mediumia. Kun inokulaatio on tehty, toinen putki peitetään mineraaliöljyllä tai sulatetulla parafiinilla. Toinen putki jätetään avoimeksi ilmalle.

Hiilihydraatin oksidatiivinen hyödyntäminen johtaa hapon tuotantoon (keltainen) vain avoimessa putkessa. Hiilihydraatin fermentatiivinen hyödyntäminen johtaa hapon tuotantoon (keltainen) sekä avoimessa että suljetussa putkessa. Päällekkäisissä putkissa tapahtuvien happomuutosten katsotaan olevan seurausta todellisesta käymisestä, kun taas avoimissa putkissa tapahtuva happokehitys johtuu läsnä olevan hiilihydraatin oksidatiivisesta hyödyntämisestä. Asakkarolyyttiset organismit eivät tuota happoa kummassakaan putkessa.

FORMULA

Ainesosat litrassa deionisoitua vettä:*

Natriumkloridi 5. Ainesosat litrassa deionisoitua vettä:*

Natriumkloridi 5.0gm
Pancreatic Digest of Casein 2.0gm
Dikaliumfosfaatti 0.3gm
Bromothymol Blue 0.08gm
Agar 2.0gm

Lisäksi OF-media, jossa on hiilihydraattia, sisältää 10.0gm/L spesifistä hiilihydraattia.

Lopullinen pH 6,8 +/- 0,2 25ºC:ssa.

* Säädetty ja/tai täydennetty tarpeen mukaan suorituskykyvaatimusten täyttämiseksi.

VARASTOINTI JA SÄILYTYSOLOSUHTEET

Varastointi: Vastaanotettuaan varastoidaan 2-8ºC:ssa. (paitsi tuotenro Y51, säilytetään 2-30ºC:ssa) suoralta valolta suojattuna. Väliaineita ei saa käyttää, jos niissä on merkkejä kontaminaatiosta, pilaantumisesta tai jos viimeinen käyttöpäivä on kulunut umpeen. Tuote on valo- ja lämpötilaherkkä; suojattava valolta, liialliselta kuumuudelta ja jäätymiseltä.

VAROTOIMENPITEET

Näytteenotto: Näytteenotto ei ole sovellettavissa, koska tätä elatusainetta ei ole tarkoitettu ensisijaiseen eristämiseen kliinisistä näytteistä. Yleissääntönä on, että tartuntavaarallinen materiaali on toimitettava viipymättä suoraan laboratorioon ja suojattava liialliselta kuumuudelta ja kylmältä. Jos käsittely viivästyy, näyte on inokuloitava sopivaan kuljetusalustaan ja säilytettävä kylmässä inokulointiin asti. Näytteiden keräämistä koskevia tietoja on saatavilla luettelossa mainituista viitteistä. (1-5)

Käyttötapa:

1. Anna väliaineen tasaantua huoneenlämpötilaan.

2. Saadaan puhtaita, eristettyjä pesäkkeitä 18-24 tunnin viljelystä.

3. Jokaisen testattavan organismin osalta inokuloidaan putket kahtena kappaleena. Inokuloi pistämällä agariin noin 1/4 tuuman päähän pohjasta.

4. Levitä steriiliä mineraaliöljyä, steriiliä sulatettua parafiinia tai steriiliä sulatettua vaseliinia yhteen jokaiseen kaksoisputkeen. Kiristä päällystetyn putken korkki ja löysää päällystämättömän putken korkki.

5. Inkuboidaan molempia putkia aerobisesti 35 ºC:ssa enintään 14 päivän ajan.

6. Tutkitaan putket päivittäin.

7. OF-perusmediumia (tuotenro Y51) sisältävä kontrolliputki inokuloidaan ja inkuboidaan samanaikaisesti OF-testien kanssa.

TULOSTEN TULKINTA

Positiivinen hiilihydraattien hyväksikäyttökoe näkyy keltaisen värin kehittymisenä väliaineeseen.

Negatiivinen hiilihydraattien hyödyntämistesti osoitetaan keltaisen värin puuttumisella (väliaine pysyy vihreänä tai muuttuu siniseksi).

Aineenvaihduntatapa määritetään seuraavasti:

Hiilihydraattien hyväksikäyttö Avoin putki
(ei päällekkäisyyttä) 		Suljettu putki
(öljyn päällekkäisyys)
Oksidoituminen Positiivinen (keltainen) Negatiivinen (vihreä)
Fermentaatio Positiivinen (keltainen) Positiivinen (keltainen) Positiivinen (keltainen)
ei-hapettaja/ei-käyttäjä Negatiivinen (vihreä tai sininen) Negatiivinen (vihreä)
Sekä hapetus että käyminen Positiivinen (keltainen) Positiivinen (keltainen) Positiivinen (keltainen)

Huom: Värireaktioita on verrattava OF Base Mediumiin (Cat. No. Y51) kontrolliputkeen.

RAJOITUKSET

Eliöt, jotka hapettavat vain dekstroosia, eivät fermentoi muita hiilihydraatteja. Muut hiilihydraatit vain hapettuvat. Päällekkäinen (suljettu) putki voidaan siksi jättää pois määritettäessä tällaisten organismien muiden hiilihydraattien käyttöä.

Jotkin mikro-organismit eivät kasva OF-perusmediassa. Saattaa olla tarpeen käyttää toista dekstroosia sisältävää perusmediumia negatiivisen reaktion vahvistamiseksi.

Jotkin mineraaliöljyt ovat happamia ja voivat johtaa virheellisiin tuloksiin.

TARVITTAVAT MATERIAALIT, JOITA EI TOIMITETA

Tavanomaisia mikrobiologisia tarvikkeita ja laitteita, kuten silmukoita, muita viljelymedioita, pyyhkäisypuikkoja, steriiliä mineraaliöljyä, applikaattorikeppejä, polttolaitteita ja inkubaattoreita jne. sekä serologisia ja biokemiallisia reagensseja, ei toimiteta.

LAADUNVALVONTA

Testiorganismit Inokulaatiomenetelmä* INKUBOINTI Tulokset
Aika Lämpötila Atmosf:
Escherichia coli
ATCC® 25922		 D 18-48hr 35°C Aerobinen Kasv; ei värinmuutosta (yläosa voi muuttua siniseksi 48 tunnin kuluttua) avoimessa putkessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
OF Dextrose:
Escherichia coli
ATCC® 25922		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happoreaktio (keltainen) ja kaasu avoimessa putkessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Pseudomonas aeruginosa
ATCC® 27853		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa putkessa; ei muutosta öljyllä päällystetyssä putkessa
OF Fruktoosi:
Klebsiella pneumoniae
ATCC® 13883		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu, negatiivinen käyminen ja hapettuminen – vihreä
Laktoosista:
Enterobacter cloacae
ATCC® 23355		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; negatiivinen hapettuminen ja käyminen-vihreä
Maltoosista:
Klebsiella pneumoniae
ATCC® 13883		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; ei värinmuutosta kummassakaan putkessa
Of mannitoli:
Enterococcus faecalis
ATCC® 29212		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu: (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Escherichia coli
ATCC® 25922		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu, negatiiviset hapettumis- ja käymisreaktiot – vihreä
Sakkaroosista:
Enterobacter aerogenes
ATCC® 13048		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; negatiivinen hapettuminen ja käyminen – vihreä
Ksyloosista:
Enterobacter aerogenes
ATCC® 13048		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; happo (keltainen) reaktio avoimessa ja öljyllä päällystetyssä putkessa
Branhamella (Moraxella) catarrhalis
ATCC® 25240		 D 18-24hr 35°C Aerobinen Kasvu; negatiivinen hapettuminen ja käyminen – vihreä

Käyttäjän laadunvalvonta

FYSIKAALINEN ULKOPUOLI

Pohjustusmedian tulee näkyä kevyesti opaalinhohtoisena ja vihreänä.

OF dekstroosi, E. coli

Escherichia coli (ATCC® 25922) kasvaa Oxidative-Fermentative Base (tuotenro Y51) ja OF Dextrose (tuotenro Y57) -medioissa. Inokuloitiin kahtena kappaleena, ja mineraaliöljyä (tuotenro Z79) levitettiin päällekkäin yhdelle kappaleelle kustakin kappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkissa oli kiristetyt korkit) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Dextrose, S. flexneri

Shigella flexneri (ATCC ® 12022) kasvaa Oxidative-Fermentative Base- (kts. nro Y51) ja OF Dextrose (kts. nro Y57) -medioissa. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyä (tuotenro Z79). Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Dekstroosi, P. aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa (ATCC ® 27853), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäksessä (tuotenro Y51) ja OF dekstroosissa (tuotenro Y57). Inokuloitiin kahtena kappaleena, ja mineraaliöljyä (tuotenro Z79) levitettiin päällekkäin yhdelle kappaleelle kustakin kappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Fruktoosi, K. pneumoniae

Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base (tuotenro Y51) ja OF Fruktoosi (tuotenro Y58) -alustoilla. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja mineraaliöljyä (kts. nro Z79) levitettiin päällekkäin yhteen kappaleeseen kustakin kaksoiskappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF-fruktoosi, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base- (tuotenro Y51) ja OF-fruktoosi (tuotenro Y58) -alustoilla. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja mineraaliöljyä (kts. nro Z79) levitettiin päällekkäin yhteen kappaleeseen kustakin kaksoiskappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Lactose, E. cloacae

Enterobacter cloacae (ATCC ® 23355), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäksessä (tuotenro Y51) ja OF Lactose (tuotenro Y54) -alustassa. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyn (kts. nro Z79) päällyslevy. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Lactose, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisella alustalla (tuotenro Y51) ja OF Lactose (tuotenro Y54) -alustalla. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyn (kts. nro Z79) päällys. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Mannitol, E. faecalis

Enterococcus faecalis (ATCC ® 29212), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base- (tuotenro Y51) ja OF Mannitol (tuotenro Y53) -medioissa. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyä (tuotenro Z79). Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkissa oli kiristetyt korkit) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Mannitoli, E. coli

Escherichia coli (ATCC ® 25922), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base (kts. nro Y51) ja OF Mannitoli (kts. nro Y53) -medioissa. Inokuloitiin kahtena kappaleena, ja mineraaliöljyä (kts. nro Z79) levitettiin päällekkäin yhdelle kappaleelle kustakin kappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkissa oli kiristetyt korkit) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Mannitol, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base (tuotenro Y51) ja OF Mannitol (tuotenro Y53) -alustoilla. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyn (kts. nro Z79) päällys. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkissa oli kiristetyt korkit) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Maltose, K. pneumoniae

Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäksessä (tuotenro Y51) ja OF Maltose (tuotenro Y52) -medioissa. Inokuloitiin kahtena kappaleena, ja mineraaliöljyä (tuotenro Z79) levitettiin päällekkäin yhteen kappaleeseen kustakin kappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Maltose, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäksessä (tuotenro Y51) ja OF Maltose (tuotenro Y52) -medioissa. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja mineraaliöljyä (kts. nro Z79) levitettiin päällekkäin yhteen kappaleeseen kustakin kaksoiskappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF-sakkaroosi, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäskasvualustassa (tuotenro Y51) ja OF-sakkaroosi-medioissa (tuotenro Y55). Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyn (kts. nro Z79) päällys. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Sakkaroosi, E. aerogenes

Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048), joka kasvaa oksidatiivis-fermentatiivisessa emäksessä (tuotenro Y51) ja OF Sakkaroosissa (tuotenro Y55). Inokuloitiin kahtena kappaleena, ja mineraaliöljyä (tuotenro Z79) levitettiin päällekkäin yhdelle kappaleelle kustakin kappaleesta. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkissa oli kiristetyt korkit) 24 tuntia 35 ºC:ssa

OF Xylose, E. aerogenes

Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base- (kts. nro Y51) ja OF Xylose (kts. nro Y56) -medioissa. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhdelle kaksoiskappaleelle levitettiin mineraaliöljyn (kts. nro Z79) päällys. Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

OF Xylose, B. catarrhalis

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240), joka kasvaa Oxidative-Fermentative Base (tuotenro Y51) ja OF Xylose (tuotenro Y56) -alustoilla. Inokuloitiin kaksoiskappaleina, ja yhden kaksoiskappaleen päälle levitettiin mineraaliöljyä (tuotenro Z79). Inkuboitiin aerobisesti (päällekkäisputkien korkit oli kiristetty) 24 tuntia 35 ºC:ssa.

1. Anderson, N.L., et al. Cumitech 3B; Quality Systems in the Clinical Microbiology Laboratory (Laatujärjestelmät kliinisen mikrobiologian laboratoriossa), koordinoiva toimitus, A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

2. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

. Jorgensen. et al. Manual of Clinical Microbiology, American Society for Microbiology, Washington, D.C.

3. Tille, P., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.

4. Isenberg, H.D. Kliinisen mikrobiologian menettelytapojen käsikirja, Vol. I, II & III. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

5. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

. Koneman, E.W., et al. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.

6. Koneman, E.W. ja muut. Hugh, R. ja Leifson, E.J. 1953. Bacteriol.; 66:24-26.

ATCC on American Type Culture Collectionin rekisteröity tavaramerkki.

IFU-10625

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.