| Best.nr. Y51 | OF Basismedium, 13x100mm rør, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Kat. nr. Y57 | OF Dextrose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Kat. nr. Y58 | OF Fructose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Kat. nr. Y54 | OF Lactose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Kat. nr. Y52 | OF Maltose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Best.nr. Y53 | OF Mannitol, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Best.nr. Y55 | OF Saccharose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
| Best.nr. Y56 | OF Xylose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 eller 100 rør/æske |
ANVENDELSE
Hardy Diagnostics OF Basal Medium anbefales til påvisning af oxidation eller fermentering af kulhydrater af bakterier.
RESUMÉ
OF Basal Medium blev udviklet af Hugh og Leifson til at hjælpe med at identificere gramnegative bakterier på grundlag af deres evne til at oxidere eller fermentere et bestemt kulhydrat. (6)
Sammenlignet med andre OF-medier anvender Hugh og Leifsons formel et lavt pepton/kulhydrat-forhold og en minimal mængde agar. Den nedsatte mængde pepton reducerer dannelsen af alkaliske aminer, som i sidste ende kan maskere de små mængder syre, der kan dannes fra oxidativ metabolisme. (5) Det øgede kulhydrat resulterer i en stigning i den mængde syre, der kan dannes. Den lille mængde agar, der er tilsat mediet, giver en halvfast struktur, som koncentrerer syren på reaktionsstedet og dermed letter den visuelle fortolkning af pH-skiftet.
En korrekt udførelse af OF-testen kræver, at der inokuleres en organisme til to rør af hvert OF-medium. Når de er inokuleret, overdækkes det ene rør med mineralolie eller smeltet paraffin. Det andet rør efterlades åbent for luften.
Oxidativ udnyttelse af kulhydratet vil kun resultere i syreproduktion (gul) i det åbne rør. Fermentativ udnyttelse af kulhydratet vil resultere i syreproduktion (gul) i både det åbne og det lukkede rør. Syreforandringer i de overlejrede rør anses for at være et resultat af ægte gæring, mens syreudviklingen i de åbne rør skyldes oxidativ udnyttelse af det tilstedeværende kulhydrat. Asaccharolytiske organismer vil ikke producere syre i nogen af rørene.
FORMEL
Ingredienser pr. liter deioniseret vand:*
| Natriumklorid | 5.0gm |
| Pancreatisk fordøjelsesprodukt af kasein | 2.0gm |
| Dikaliumphosphat | 0.3gm |
| Bromothymol Blue | 0.08gm |
| Agar | 2.0gm |
OF Media med kulhydrat indeholder desuden 10.0gm/L af specifikt kulhydrat.
Endelig pH 6,8 +/- 0,2 ved 25ºC.
* Justeres og/eller suppleres efter behov for at opfylde præstationskriterierne.
OPBEVARING OG HOLDbarhed
Opbevaring: Ved modtagelse opbevares ved 2-8ºC. (undtagen kat. nr. Y51, opbevares ved 2-30ºC.) væk fra direkte lys. Medier bør ikke anvendes, hvis der er tegn på kontaminering, forringelse eller hvis udløbsdatoen er overskredet. Produktet er lys- og temperaturfølsomt; beskyt mod lys, overdreven varme og frysning.
FORANSTALTNINGER
Prøveudtagning: Prøveindsamling er ikke relevant, da dette medium ikke er beregnet til primær isolering fra kliniske prøver. Som hovedregel bør infektiøst materiale indsendes direkte til laboratoriet uden forsinkelse og beskyttes mod overdreven varme og kulde. Hvis behandlingen forsinkes, skal prøven inokuleres på et egnet transportmedie og opbevares på køl indtil inokulering. Se de anførte referencer for oplysninger om prøveudtagning. (1-5)
Anvendelsesmetode:
1. Lad medierne blive afbalanceret til stuetemperatur.
2. Fremskaf rene, isolerede kolonier fra en 18-24 timers kultur.
3. For hver testorganisme inokuleres rørene i to eksemplarer. Inokulér ved at stikke agaren til ca. 1/4 tomme fra bunden.
4. Der påføres steril mineralolie, steril smeltet paraffin eller steril smeltet petrolatum på et af hvert af de to rør i dobbeltudgave. Luk låget på det overlejrede rør fast, og løsn låget på det ikke-overlejrede rør.
5. Begge rør inkuberes aerobt ved 35ºC. i op til 14 dage.
6. Rørene undersøges dagligt.
7. Et kontrolrør med OF-basismedium (kat. nr. Y51) skal inokuleres og inkuberes parallelt med OF-testene.
FORSTÅELSE AF RESULTATER
En positiv kulhydratudnyttelsestest er angivet ved udvikling af en gul farve i mediet.
En negativ kulhydratudnyttelsestest er angivet ved fravær af gul farve (mediet forbliver grønt eller bliver blåt).
Metoden for metabolisme bestemmes på følgende måde:
| Kulhydratudnyttelse | Åbent rør (ingen overlejring) |
Lukket rør (olieoverlejring) |
|
| Oxidation | Positiv (gul) | Negativ (grøn) | |
| Fermentering | Positiv (gul) | Positiv (gul) | Positiv (gul) |
| Ikke-oxidation/ikke-fermentering | Negativ (grøn eller blå) | Negativ (grøn) | |
| Både oxidation og fermentering | Positiv (gul) | Positiv (gul) | Positiv (gul) |
Bemærk: Farvereaktionerne bør sammenlignes med OF-basismediet (kat. nr. Y51) kontrolrør.
BEGRÆNSNINGER
Organismer, der kun oxiderer dextrose, vil ikke fermentere andre kulhydrater. Andre kulhydrater vil kun blive oxideret. Det overlejrede (lukkede) rør kan derfor udelades ved bestemmelse af sådanne organismers udnyttelse af andre kulhydrater.
Nogle mikroorganismer vokser ikke i OF Basal Medium. Det kan være nødvendigt at anvende et andet basalmedium indeholdende druesukker for at bekræfte den negative reaktion.
Visse mineralolier er sure og kan resultere i fejlagtige resultater.
MATERIALER, SOM ER NØDVENDIGE, MEN IKKE FORSVARET
Mikrobiologiske standardartikler og -udstyr såsom loops, andre kulturmedier, vatpinde, steril mineralolie, applikatorpinde, forbrændingsanlæg og inkubatorer osv. samt serologiske og biokemiske reagenser leveres ikke.
KVALITETSKONTROL
| Testorganismer | Inokulationsmetode* | Inkubation | Resultater | |||||||
| Tid | Temperatur | |||||||||
| af grundmedium: | ||||||||||
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-48 timer | 35°C | Aerobisk | Vækst: | D | 18-48 timer | 35°C | Aerobisk | Vækst; ingen farveændring (toppen kan blive blå efter 48 timer) i åbent rør og i rør med olieovertræk |
| OF Dextrose: | ||||||||||
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobisk | Vækst; syrereaktion (gul) og gas i åbent rør og i rør med olieovertræk | |||||
| Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 |
D | 18-24 timer | 35°C | Aerob | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent rør; ingen ændring i rør med olieovertræk | |||||
| OF Fructose: | ||||||||||
| Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst, negativ gæring og oxidation – grøn | |||||
| af laktose: | ||||||||||
| Enterobacter cloacae ATCC® 23355 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobisk | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; negativ oxidation og gæring – grøn | |||||
| af maltose: | ||||||||||
| Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; ingen farveændring i begge rør | OF Mannitol: | ||||
| Enterococcus faecalis ATCC® 29212 |
D | 18-24 timer | 35°C | Aerobic | Vækst: (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst, negative oxidations- og fermenteringsreaktioner – grøn | |||||
| af saccharose: | ||||||||||
| Enterobacter aerogenes ATCC® 13048 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; negativ oxidation og gæring – grøn | |||||
| af Xylose: | ||||||||||
| Enterobacter aerogenes ATCC® 13048 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobisk | Vækst; sur (gul) reaktion i åbent og oliebelagt rør | |||||
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobic | Vækst; negativ oxidation og fermentering – grøn | |||||
Brugers kvalitetskontrol
FYSISK UDSEENDE
Grundlagsmedier skal fremstå let opaliserende og grønt i farven.
Escherichia coli (ATCC® 25922) vokser i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Dextrose (kat. nr. Y57) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rørene var forsynet med stramt låg) i 24 timer ved 35 ºC.
Shigella flexneri (ATCC ® 12022) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Dextrose (kat. nr. Y57) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Pseudomonas aeruginosa (ATCC ® 27853) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Dextrose (kat. nr. Y57) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Fructose (kat. nr. Y58) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) vokser i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Fructose (kat. nr. Y58) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Enterobacter cloacae (ATCC ® 23355) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Lactose (kat. nr. Y54) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) vokser i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Lactose (kat. nr. Y54) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Enterococcus faecalis (ATCC ® 29212) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Mannitol (kat. nr. Y53) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Escherichia coli (ATCC ® 25922) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Mannitol (kat. nr. Y53) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Mannitol (kat. nr. Y53) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) vokser i Oxidative-Fermentative Base (kat.nr. Y51) og OF Maltose (kat.nr. Y52) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Maltose (kat. nr. Y52) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Saccharose (kat. nr. Y55) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Saccharose (kat. nr. Y55) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rørene havde strammet låg) i 24 timer ved 35ºC
Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Xylose (kat. nr. Y56) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) voksende i Oxidative-Fermentative Base (kat. nr. Y51) og OF Xylose (kat. nr. Y56) medier. Inokuleret i to eksemplarer, med mineralolie (kat. nr. Z79) påført på et af hvert eksemplar. Inkuberet aerobt (overlay-rør med fastgjort låg) i 24 timer ved 35ºC.
1. Anderson, N.L., et al. Cumitech 3B; Quality Systems in the Clinical Microbiology Laboratory, Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Jorgensen, et al. Manual of Clinical Microbiology, American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Tille, P., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.
4. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook, Vol. I, II & III. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Koneman, E.W., et al. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.
6. Hugh, R. og Leifson, E.J. 1953. Bacteriol.; 66:24-26.
ATCC er et registreret varemærke tilhørende American Type Culture Collection.
IFU-10625