Milieu oxydatif-fermentaire (OF milieu de base)

Cat. no. Y51	Milieu de base OF, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y57	OF Dextrose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y58	OF Fructose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y54	OF Lactose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y52	OF Maltose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y53	OF Mannitol, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y55	OF Sucrose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte
Cat. no. Y56	OF Xylose, tube 13x100mm, 3ml	20 ou 100 tubes/boîte

USAGE PRÉVU

Le milieu de base OF de Hardy Diagnostics est recommandé pour la détection de l’oxydation ou de la fermentation des glucides par les bactéries.

RÉSUMÉ

Le milieu basal OF a été développé par Hugh et Leifson pour faciliter l’identification des bactéries gram-négatives sur la base de leur capacité à oxyder ou à fermenter un hydrate de carbone spécifique. (6)

Par rapport aux autres milieux OF, la formule de Hugh et Leifson utilise un faible rapport peptone/glucides et une quantité minimale d’agar. La quantité réduite de peptone réduit la formation d’amines alcalines qui peuvent finalement masquer les petites quantités d’acide qui peuvent être produites par le métabolisme oxydatif. (5) L’augmentation des glucides entraîne une augmentation de la quantité d’acide qui peut être formée. La petite quantité d’agar ajoutée au milieu fournit une structure semi-solide qui concentre l’acide au point de réaction, facilitant ainsi l’interprétation visuelle du changement de pH.

La bonne exécution du test OF exige qu’un organisme soit inoculé à deux tubes de chaque milieu OF. Une fois inoculé, un tube est recouvert d’huile minérale ou de paraffine fondue. L’autre tube est laissé ouvert à l’air.

L’utilisation oxydative de l’hydrate de carbone entraînera une production d’acide (jaune) dans le tube ouvert uniquement. L’utilisation fermentative des hydrates de carbone entraînera la production d’acide (jaune) dans les deux tubes, ouvert et fermé. Les changements acides dans les tubes superposés sont considérés comme le résultat d’une véritable fermentation, tandis que le développement acide dans les tubes ouverts est dû à l’utilisation oxydative des glucides présents. Les organismes asaccharolytiques ne produisent pas d’acide dans les deux tubes.

FORMULE

Ingrédients par litre d’eau désionisée:*

Chlorure de sodium	5.0gm
Digest pancréatique de caséine	2,0gm
Phosphate dipotassique	0.3gm
Bleu bromothymol	0,08gm
Agar	2,0gm

En outre, le milieu OF avec hydrate de carbone contient 10,0gm/L d’hydrate de carbone spécifique.

pH final 6,8 +/- 0,2 à 25ºC.

* Ajusté et/ou complété selon les besoins pour répondre aux critères de performance.

STOCKAGE ET VIE DE CONSERVATION

Stockage : Dès réception, stocker à 2-8ºC. (à l’exception du n° de cat. Y51, stocker à 2-30ºC.) à l’abri de la lumière directe. Les supports ne doivent pas être utilisés s’il y a des signes de contamination, de détérioration ou si la date d’expiration est dépassée. Le produit est sensible à la lumière et à la température ; protéger de la lumière, de la chaleur excessive et du gel.

PRÉCAUTIONS

Collecte de spécimens : Le prélèvement d’échantillons n’est pas applicable puisque ce milieu n’est pas destiné à l’isolement primaire d’échantillons cliniques. En règle générale, le matériel infectieux doit être soumis directement au laboratoire sans délai et protégé de la chaleur et du froid excessifs. Si le traitement doit être retardé, l’échantillon doit être inoculé sur un milieu de transport approprié et réfrigéré jusqu’à l’inoculation. Consultez les références listées pour obtenir des informations sur la collecte des spécimens. (1-5)

Méthode d’utilisation :

1. Laisser les milieux s’équilibrer à la température ambiante.

2. Obtenir des colonies pures et isolées à partir d’une culture de 18 à 24 heures.

3. Pour chaque organisme à tester, inoculez les tubes en double. Inoculer en poignardant la gélose jusqu’à environ 1/4 de pouce du fond.

4. Appliquez de l’huile minérale stérile, de la paraffine fondue stérile ou de la vaseline fondue stérile sur un de chaque tube en double. Serrer le bouchon du tube superposé, et desserrer le bouchon du tube non superposé.

5. Incuber les deux tubes en aérobiose à 35ºC pendant un maximum de 14 jours.

6. Examinez les tubes quotidiennement.

7. un tube témoin de milieu de base OF (n° de cat. Y51) doit être inoculé et incubé en parallèle avec les tests OF.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Un test positif d’utilisation des hydrates de carbone est indiqué par le développement d’une couleur jaune dans le milieu.

Un test d’utilisation des glucides négatif est indiqué par l’absence de couleur jaune (le milieu reste vert ou devient bleu).

La méthode de métabolisme est déterminée comme suit :

Utilisation des hydrates de carbone	Tube ouvert (pas de recouvrement)	Tube fermé (recouvrement d’huile)
Oxydation	Positive (jaune)	Négative (verte)
Fermentation	Positive (jaune)	Positive (jaune)
Non-fermenteuroxydant/non fermenteur	Négatif (Vert ou Bleu)	Négatif (Vert)
A la fois oxydation et fermentation	Positif (Jaune)	Positif (Jaune)

Note : Les réactions colorées doivent être comparées au milieu de base OF (Cat. no. Y51).

LIMITATIONS

Les organismes qui oxydent uniquement le dextrose ne fermenteront aucun autre glucide. Les autres glucides seront seulement oxydés. Le tube superposé (fermé), par conséquent, peut être omis lors de la détermination de l’utilisation d’autres glucides de tels organismes.

Certains micro-organismes ne se développent pas dans le milieu de base OF. Il peut être nécessaire d’utiliser un autre milieu de base contenant du dextrose pour confirmer la réaction négative.

Certaines huiles minérales sont acides et peuvent entraîner des résultats erronés.

MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI

Les fournitures et équipements microbiologiques standard tels que les boucles, les autres milieux de culture, les écouvillons, l’huile minérale stérile, les bâtonnets applicateurs, les incinérateurs et les incubateurs, etc. ainsi que les réactifs sérologiques et biochimiques, ne sont pas fournis.

Contrôle de qualité

Organismes d’essai	Méthode d’inoculation*	Incubation			Résultats
Organismes d’essai	Méthode d’inoculation*	Temps	Température	Atmosphère	Résultats
Du milieu de base :
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-48h	35°C	Aérobie	Croissance ; pas de changement de couleur (le sommet peut devenir bleu à 48 heures) dans le tube ouvert et dans le tube recouvert d’huile
Dextrose :
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) et gaz en tube ouvert et en tube recouvert d’huile
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) dans le tube ouvert ; pas de changement dans le tube recouvert d’huile
OF Fructose :
Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance, fermentation négative et oxydation – vert
de lactose :
Enterobacter cloacae ATCC® 23355	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; oxydation négative et fermentation verte
du maltose :
Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) dans le tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24hr	35°C	Aérobie	Croissance ; pas de changement de couleur dans les deux tubes
De mannitol :
Enterococcus faecalis ATCC® 29212	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance : réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Escherichia coli ATCC® 25922	D	18-24hr	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance, réactions négatives d’oxydation et de fermentation – vert
De saccharose :
Enterobacter aerogenes ATCC® 13048	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; oxydation négative et fermentation – verte
de Xylose :
Enterobacter aerogenes ATCC® 13048	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; réaction acide (jaune) en tube ouvert et recouvert d’huile
Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240	D	18-24h	35°C	Aérobie	Croissance ; oxydation négative et fermentation – vert

Contrôle de qualité de l’utilisateur

APARENCE PHYSIQUE

Du milieu de base doit apparaître légèrement opalescent, et de couleur verte.

Escherichia coli (ATCC® 25922) se développant dans les milieux Base fermentaire oxydative (n° de cat. Y51) et OF Dextrose (n° de cat. Y57). Inoculation en deux exemplaires, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un exemplaire de chaque exemplaire. Incubés en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Shigella flexneri (ATCC ® 12022) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Dextrose (Cat. no. Y57). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Pseudomonas aeruginosa (ATCC ® 27853) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Dextrose (Cat. no. Y57). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Fructose (Cat. no. Y58). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Fructose (Cat. no. Y58). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Enterobacter cloacae (ATCC ® 23355) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Lactose (Cat. no. Y54). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Lactose (Cat. no. Y54). Inoculation en deux exemplaires, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un exemplaire de chaque exemplaire. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Enterococcus faecalis (ATCC ® 29212) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Escherichia coli (ATCC ® 25922) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Maltose (Cat. no. Y52). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Maltose (Cat. no. Y52). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Sucrose (Cat. no. Y55). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Sucrose (Cat. no. Y55). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubés en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC

Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Xylose (Cat. no. Y56). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) se développant dans les milieux Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) et OF Xylose (Cat. no. Y56). Inoculation en double, avec une couche d’huile minérale (Cat. no. Z79) appliquée sur un de chaque double. Incubation en aérobiose (les tubes de recouvrement avaient des bouchons serrés) pendant 24 heures à 35ºC.

1. Anderson, N.L., et al. Cumitech 3B ; Systèmes de qualité dans le laboratoire de microbiologie clinique, édition coordonnée, A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

2. Jorgensen., et al. Manuel de microbiologie clinique, American Society for Microbiology, Washington, D.C.

3. Tille, P., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.

4. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook, Vol. I, II & III. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

5. Koneman, E.W., et al. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, J.B. Lippincott Company, Philadelphie, PA.

6. Hugh, R. et Leifson, E.J. 1953. Bacteriol. ; 66:24-26.

ATCC est une marque déposée de l’American Type Culture Collection.

IFU-10625