| Cat. no. Y51 | DE MEDIO BASE, Tubo 13x100mm, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y57 | DEXTROSA, tubo 13x100mm, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y58 | OF Fructose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y54 | OF Lactose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y52 | OF Maltose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y53 | OF Manitol, tubo 13x100mm, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y55 | DE sacarosa, tubo 13x100mm, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
| Cat. no. Y56 | OF Xylose, 13x100mm Tube, 3ml | 20 o 100 tubos/caja |
USO PREVISTO
Hardy Diagnostics OF Basal Medium se recomienda para la detección de la oxidación o fermentación de carbohidratos por parte de las bacterias.
RESUMEN
El medio basal OF fue desarrollado por Hugh y Leifson para ayudar a la identificación de bacterias gramnegativas sobre la base de su capacidad para oxidar o fermentar un carbohidrato específico. (6)
En comparación con otros medios OF, la fórmula de Hugh y Leifson emplea una baja relación peptona/carbohidrato y una cantidad mínima de agar. La menor cantidad de peptona reduce la formación de aminas alcalinas que, en última instancia, pueden enmascarar las pequeñas cantidades de ácido que pueden producirse a partir del metabolismo oxidativo. (5) El aumento de hidratos de carbono provoca un aumento de la cantidad de ácido que puede formarse. La pequeña cantidad de agar añadida al medio proporciona una estructura semisólida que concentra el ácido en el punto de reacción, facilitando así la interpretación visual del cambio de pH.
La realización correcta de la prueba OF requiere que se inocule un organismo en dos tubos de cada medio OF. Una vez inoculado, un tubo se cubre con aceite mineral o parafina derretida. El otro tubo se deja abierto al aire.
La utilización oxidativa de los carbohidratos dará lugar a la producción de ácido (amarillo) sólo en el tubo abierto. La utilización fermentativa de los hidratos de carbono dará lugar a la producción de ácido (amarillo) tanto en el tubo abierto como en el cerrado. Los cambios ácidos en los tubos superpuestos se consideran resultado de una verdadera fermentación, mientras que el desarrollo ácido en los tubos abiertos se debe a la utilización oxidativa del carbohidrato presente. Los organismos asacarolíticos no producirán ácido en ninguno de los tubos.
FÓRMULA
Ingredientes por litro de agua desionizada:*
| Cloruro de sodio | 5.0gm |
| Digestión pancreática de caseína | 2,0gm |
| Fosfato dipotásico | 0.3gm |
| Azul de bromotimol | 0,08gm |
| Agar | 2,0gm |
Además, el medio OF con carbohidratos contiene 10,0gm/L de carbohidratos específicos.
pH final 6,8 +/- 0,2 a 25ºC.
* Ajustado y/o suplementado según se requiera para cumplir con los criterios de rendimiento.
ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL
Almacenamiento: Tras la recepción, almacenar a 2-8ºC. (excepto el nº de cat. Y51, que se almacena a 2-30ºC.) lejos de la luz directa. Los medios no deben utilizarse si hay signos de contaminación, deterioro o si ha pasado la fecha de caducidad. El producto es sensible a la luz y a la temperatura; protéjase de la luz, del calor excesivo y de la congelación.
PRECAUCIONES
Recogida de muestras: La recogida de muestras no es aplicable ya que este medio no está destinado al aislamiento primario de muestras clínicas. Como regla general, el material infeccioso debe enviarse directamente al laboratorio sin demora y protegido del calor y el frío excesivos. Si hay un retraso en el procesamiento, el espécimen debe ser inoculado en un medio de transporte apropiado y refrigerado hasta la inoculación. Consulte las referencias enumeradas para obtener información sobre la recogida de muestras. (1-5)
Método de uso:
1. Deje que los medios se equilibren a temperatura ambiente.
2. Obtener colonias puras y aisladas de un cultivo de 18-24 horas.
3. Para cada organismo de prueba, inocular los tubos por duplicado. Inocular pinchando el agar hasta aproximadamente 1/4 de pulgada del fondo.
4. Aplicar aceite mineral estéril, parafina fundida estéril o vaselina fundida estéril en uno de cada tubo por duplicado. Apretar el tapón del tubo superpuesto y aflojar el tapón del tubo no superpuesto.
5. Incubar ambos tubos aeróbicamente a 35ºC. durante un máximo de 14 días.
6. Examinar los tubos diariamente.
7. Deberá inocularse un tubo de control con medio de base OF (n.º de cat. Y51) e incubarse en paralelo con las pruebas OF.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Una prueba de utilización de carbohidratos positiva se indica por el desarrollo de un color amarillo en el medio.
Una prueba de utilización de carbohidratos negativa se indica por la ausencia de un color amarillo (el medio permanece verde o se vuelve azul).
El método de metabolismo se determina como sigue:
| Utilización de hidratos de carbono | Tubo abierto (Sin superposición) |
Tubo cerrado (Superposición de aceite) |
| Oxidación | Positivo (Amarillo) | Negativo (Verde) |
| Fermentación | Positivo (Amarillo) | Positivo (Amarillo) |
| Nooxidante/no fermentador | Negativo (verde o azul) | Negativo (verde) |
| Tanto oxidación como fermentación | Positivo (amarillo) | Positivo (amarillo) |
Nota: Las reacciones de color deben compararse con el tubo de control OF Base Medium (Cat. Y51).
LIMITACIONES
Los organismos que sólo oxidan la dextrosa no fermentarán ningún otro carbohidrato. Otros carbohidratos sólo serán oxidados. El tubo superpuesto (cerrado), por lo tanto, puede omitirse al determinar la utilización de otros carbohidratos de tales organismos.
Algunos microorganismos no crecen en el medio basal OF. Puede ser necesario utilizar otro medio basal que contenga dextrosa para confirmar la reacción negativa.
Algunos aceites minerales son ácidos y pueden dar lugar a resultados erróneos.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
No se suministran suministros y equipos microbiológicos estándar tales como bucles, otros medios de cultivo, hisopos, aceite mineral estéril, palos aplicadores, incineradores e incubadoras, etc., así como reactivos serológicos y bioquímicos.
CONTROL DE CALIDAD
| Organismos de prueba | Método de inoculación* | Incubación | Resultados | ||
| Tiempo | Temperatura | Atmósfera | |||
| Del Medio Base: | |||||
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-48hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; no hay cambio de color (la parte superior puede volverse azul a las 48 horas) en el tubo abierto y en el tubo recubierto de aceite |
| OF Dextrose: | |||||
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobiosis | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) y gaseosa en tubo abierto y en tubo recubierto de aceite |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en el tubo abierto; ningún cambio en el tubo recubierto de aceite |
| Fructosa: | |||||
| Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobios | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento, fermentación negativa y oxidación – verde |
| De lactosa: | |||||
| Enterobacter cloacae ATCC® 23355 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobio | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; oxidación negativa y fermentación-verde |
| De maltosa: | |||||
| Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobios | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; sin cambio de color en ninguno de los dos tubos | OF Mannitol: |
| Enterococcus faecalis ATCC® 29212 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobios | Crecimiento: reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Escherichia coli ATCC® 25922 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobio | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento, reacciones negativas de oxidación y fermentación – verde |
| De sacarosa: | |||||
| Enterobacter aerogenes ATCC® 13048 |
D | 18-24hr | 35°C | Crecimiento aerobio | ; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; oxidación negativa y fermentación – verde |
| De xilosa: | |||||
| Enterobacter aerogenes ATCC® 13048 |
D | 18-24hr | 35°C | Aerobio | Crecimiento; reacción ácida (amarilla) en tubo abierto y recubierto de aceite |
| Branhamella (Moraxella) catarrhalis ATCC® 25240 |
D | 18-24hr | 35°C | Aeróbica | Crecimiento; oxidación negativa y fermentación – verde |
Control de calidad del usuario
Aspecto físico
De los medios basales debe aparecer ligeramente opalescente, y de color verde.
Escherichia coli (ATCC® 25922) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Dextrosa (Cat. no. Y57). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas apretadas) durante 24 horas a 35ºC.
Shigella flexneri (ATCC ® 12022) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Dextrosa (Cat. no. Y57). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Pseudomonas aeruginosa (ATCC ® 27853) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Dextrosa (Cat. no. Y57). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Fructosa (Cat. no. Y58). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Fructosa (Cat. no. Y58). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Enterobacter cloacae (ATCC ® 23355) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Lactosa (Cat. no. Y54). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Lactosa (Cat. no. Y54). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Enterococcus faecalis (ATCC ® 29212) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Escherichia coli (ATCC ® 25922) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Mannitol (Cat. no. Y53). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Se incubaron aeróbicamente (los tubos de superposición tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Klebsiella pneumoniae (ATCC ® 13883) creciendo en medios Oxidative-Fermentative Base (Cat. no. Y51) y OF Maltose (Cat. no. Y52). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Maltose (Cat. no. Y52). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios de Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Sucrose (Cat. no. Y55). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y Sacarosa OF (Cat. no. Y55). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC
Enterobacter aerogenes (ATCC ® 13048) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Xilosa (Cat. no. Y56). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas apretadas) durante 24 horas a 35ºC.
Branhamella (Moraxella) catarrhalis (ATCC ® 25240) creciendo en medios Base Oxidativa-Fermentativa (Cat. no. Y51) y OF Xilosa (Cat. no. Y56). Inoculados por duplicado, con aceite mineral (Nº de cat. Z79) aplicado a uno de cada duplicado. Incubados aeróbicamente (los tubos superpuestos tenían tapas ajustadas) durante 24 horas a 35ºC.
1. Anderson, N.L., et al. Cumitech 3B; Quality Systems in the Clinical Microbiology Laboratory, Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Jorgensen, et al. Manual of Clinical Microbiology, American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Tille, P., et al. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, C.V. Mosby Company, St. Louis, MO.
4. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook, Vol. I, II & III. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Koneman, E.W., et al. Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA.
6. Hugh, R. y Leifson, E.J. 1953. Bacteriol.; 66:24-26.
ATCC es una marca registrada de la American Type Culture Collection.
IFU-10625